[发明专利]一种寻找自发性高血压病致病相关基因的方法

摘要

本发明公开了一种寻找自发性高血压病致病相关基因的方法，对试验组和对照组的阻力血管组织和肾脏组织进行采集，并通过基因芯片法、RT－PCR、实时定量RT－PCR逐次筛选验证，排出假阳性的候选基因，来获得与自发性高血压病致病相关基因。本发明的优点在于：通过对试验组和对照组的阻力血管组织和肾脏组织进行采集，并通过基因芯片法、RT－PCR、实时定量RT－PCR逐次筛选验证，排出假阳性表达的候选基因，比较可靠稳定地寻找到与自发性高血压病致病相关基因，并且本发明选用阻力血管组织和肾脏组织作为组织采集对象，使寻找到的基因更加可靠，另外本发明寻找与自发性高血压病致病相关基因的方法，对建立新的高血压诊断方法以及开发高血压病新的基因治疗药物具有非常重要的意义。

主权项

1.一种寻找自发性高血压病致病相关基因的方法，其特征是包括以下步骤：(1)、试验组和对照组的选取以及组织采集：选取至少三只纯种患有自发性高血压病的哺乳动物作为试验组，选择与试验组同物种且数量相同的血压正常的哺乳动物作为对照组，并分别对试验组和对照组中的哺乳动物的阻力血管组织和肾脏组织进行采集；(2)、总RNA和mRNA的提取：分别从试验组和对照组中采集到的阻力血管组织和肾脏组织中提取总RNA并进一步分离提取mRNA；(3)、mRNA逆转录合成cDNA：分别将试验组和对照组中提取的mRNA通过逆转录酶逆转录成cDNA；(4)、利用基因芯片法初步筛选有差异表达的候选基因：利用至少含10,000大鼠基因片段的芯片比较试验组和对照组的基因表达水平，寻找出在试验组基因表达水平上调的一组候选基因和下调的一组候选基因；(5)、对候选基因采用RT-PCR进行链式扩增并对链式扩增产物进行凝胶电泳分析排除基因芯片法获得的候选基因中的假阳性基因：分别对试验组和对照组候选基因的mRNA通过逆转录DNA合成酶逆转录合成cDNA，并对cDNA进行链式扩增，然后再对链式扩增产物进行凝胶电泳分析排除假阳性的候选基因；(6)、对经过RT-PCR排除后剩下的候选基因采用荧光实时定量RT-PCR进行进一步验证得到与自发性高血压病致病相关基因。