[发明专利]一种近海环境微生物高纯度大片段基因组的制备方法

摘要

一种近海微生物高纯度大片段基因组的制备方法，将分离、收集的近海微生物菌体重悬于buffer1中并和等体积的1～2％琼脂糖溶液混合形成包埋块，buffer1是每升水中含0.15～0.25M NaCl、40～60mM EDTA、8～12mM Tris，pH7.5～8.5；琼脂糖是凝固点为36～40℃的分子生物学级琼脂糖；包埋块经裂解、消化和洗涤后进行电洗脱纯化和膜浓缩。得到高浓度、高纯度的大片段基因组DNA，满足了构建宏基因组文库的需要。本发明采用电洗脱纯化基因组的方案，解决腐殖质类物质与DNA共结合的难题，从而获得结构完整的大片段基因组DNA，也避免了腐殖质类物质在后续构建基因文库时的干扰。

主权项

1、一种近海微生物高纯度大片段基因组的制备方法，包括微生物菌体的分离、收集、包埋、裂解、消化、洗涤、纯化和浓缩，其特征在于：所述的包埋是重悬于bufferl的微生物菌体和等体积的1～2％琼脂糖溶液混合形成包埋块；所述的bufferl是每升水中含0.15～0.25M NaCl、40～60mM EDTA、8～12mM Tris，pH7.5～8.5；所述的琼脂糖是凝固点为36～40℃的分子生物学级琼脂糖；所述的纯化是包埋块经裂解、消化和洗涤后进行电洗脱纯化，电洗脱在普通电泳槽中进行，条件为4℃，4～6V/cm，2～4h，然后反转电极洗脱1～2min；所述的浓缩是洗脱液置于0.025μm的滤膜上，滤膜漂浮于8～12wt％PEG8000的液面上进行浓缩。