[发明专利]反映心肌微小损伤情况的外周血cTnI基因检测方法

摘要

本发明公开了一种反映心肌微小损伤情况的外周血cTnI基因检测方法，包括合成cTnI－cDNA、cTnI基因扩增，以图像分析仪摄像、分析。本发明方法简单、易操作。

主权项

1、一种反映心肌微小损伤情况的外周血cTnI基因检测方法，其特征是：包括下列步骤：(1)取抗凝静脉血1.0ml或心肌组织50mg以Trizol试剂提取RNA，以紫外分光光度法检测总RNA浓度，取总RNA2μg以DEPC水补充至总量为13μl，置75℃3分钟，置冰中3分钟，摇匀，试管中加入5×逆转录缓冲液4μl、随机引物(100pmol)1μl、dNTPs(2.5mMol)1μl、RNAsin 0.5μl、逆转录酶0.5μl混匀，置DNA480型扩增仪中，42℃60分钟合成cTnI-cDNA，再95℃5分钟后于4℃保存；(2)参照cTnI基因序列设计巢式PCR引物扩增cTnI基因片段，cTnI基因扩增，第一阶段以外部引物；第二阶段以内部引物；GAPDH基因扩增采用一阶段法；反应总体积50μl中含DEPC水31.5μl、10×缓冲液5μl、MgCl₂(25mMol)3μl、dNTPs(10mMol)1μl、上游和下游引物(100pMol)各1μl、cTnI-cDNA模板5μl、DNA聚合酶(1u/μl)2.5μl；在预变性95℃5分后，以95℃20秒、60℃1分、72℃1分进行40个循环，再于72℃延伸10分，PCR产物在含溴乙锭的2％琼脂糖凝胶中电泳，以图像分析仪摄像、分析；其中人心肌组织及外周血中cTnI及内参基因GAPDH的引物序列及产物为：