[发明专利]具有两条活性X染色体的人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物

摘要

本发明涉及一种具有两条活性X染色体的人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物，该人孤雌胚胎干细胞系的核型在10代以前是46，XX；从第20代开始，该细胞系的核型变成了嵌合体；到了第35代，该细胞系的所有细胞都发生了一条活性X染色体的丢失；在X染色体失活的检测中，一直维持只有活性X染色体的状态，而没有发现有失活的X染色体的存在。本发明采用引起第二极体排出的人工激活条件来实现孤雌激活，由此得到所述人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物。本发明对于探讨该细胞在遗传学和表观遗传学的特性，进而应用于临床上治疗某些疾病具有重要意义，还可通过对该细胞的基因改造或表观遗传学修饰，作为细胞替代治疗的细胞来源。

主权项

1、一种具有两条活性X染色体的人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物，其特征在于：(a)该人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物的核型在10代以前是“46，XX”；从第20代开始，部分细胞发生了一条活性X染色体的丢失，该细胞系的核型变成了嵌合体“46，XX/45，X0”；随着代次的增加，45，X0的分裂相比例增加；到了第35代，核型为“45，X0”，该细胞系的所有细胞都发生了一条活性X染色体的丢失；(b)在第15代核型“46，XX”和第30代核型“46，XX/45，X0”中没有失活的X染色体存在，在X染色体失活的检测中，一直维持只有活性X染色体的状态，而没有发现有失活的X染色体的存在；(c)该人孤雌胚胎干细胞系及其衍生物是通过以下步骤制备的：a.获得成熟的处于第二次减数分裂中期的卵母细胞；b.激活卵的第二极体排出，促使其雌原核加倍形成纯合二倍体，培养该激活的细胞，诱导该细胞成为含有可辨别的内细胞团和滋养外胚层的胚胎；c.分离所述内细胞团，转入可抑制细胞分化的培养基中培养，使这些细胞保持未分化的多能状态，并传代、冷冻，经各种方法鉴定，确认为孤雌胚胎干细胞系及其衍生物。