[发明专利]基于环介导等温扩增技术的单核增生李斯特菌基因快速诊断试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提供一种基于环介导等温扩增技术的单核增生李斯特菌基因快速诊断试剂盒及其检测方法，该试剂盒由两对引物、DNA聚合酶、反应液、样品预处理液、显色液和阳性对照液组成，以上六种液体分别置于容器中。本发明的基因快速诊断试剂盒应用六个区段，四条引物，根据是否扩增就能判断靶标物质的存在与否，因此具有高特异性。本发明的基因快速诊断试剂盒快速、高效、灵敏度高，只需一个恒定温度就能扩增反应，不需要特殊试剂与设备。本发明的基因快速诊断试剂盒鉴定简便，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²⁺结合，产生副产物—焦磷酸镁沉淀，可通过肉眼观察鉴定，并且加入显色液后，阴阳性结果显色差异显著，更加明显可靠。

主权项

1、一种单核增生李斯特菌基因快速诊断试剂盒，其特征在于由两对引物、Bst DNA聚合酶、反应液、稳定液、样品预处理液、显色液和阳性对照液组成，以上七种液体分别置于容器中，上述两对引物为：外引物F3：ACAAGACTTCACCAATCCA；外引物B3：GTCTTTTAAGTGGAGTAAACCTT；内引物FIP：TAAGTCTCTTTGCAATTGACCGACTTTTACGTGTACACAGAAAAGCG；内引物BIP：CCTGTGCCAAAGCATTTTTACATTTTTTAGGCAAGTCATCTTGTTCG；上述反应液含有1.6～2mmol/L dNTP、20～25mmol/L Tris-Cl、10～12.5mmol/L氯化钾、10～12.5mmol/L硫酸铵、8～10mmol/L硫酸镁、0.1～0.125％TritonX-100、0.8～1mol/L甜菜碱、内引物FIP/BIP各1.6～2mol/L和外引物F3/B3各0.2～0.25mol/L；上述样品预处理液含有10～20mmol/L pH 8.0的Tris-HCl、1～2mmol/L EDTA和1～1.2％Triton X-100；上述阳性对照为单核增生李斯特菌基因组DNA。