[发明专利]尖海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法

摘要

一种医药技术领域的尖海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法，步骤为：(1)以尖海龙为原料，粉碎后过筛；(2)在尖海龙粗粉中加入蒸馏水，制取尖海龙蛋白粗提液；(3)将蛋白粗提液减压蒸发浓缩后，加入硫酸铵粉末进行沉淀，将沉淀用少量蒸馏水溶解，透析，浓缩，冻干后得到尖海龙粗蛋白；(4)将尖海龙粗蛋白用Tris－HCl缓冲液溶解后，进行离子交换层析，梯度NaCl缓冲液洗脱获得尖海龙抗肿瘤粗蛋白；(5)将尖海龙抗肿瘤粗蛋白用Tris－HCl缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，获得尖海龙抗肿瘤活性蛋白。本发明制得的尖海龙抗肿瘤活性蛋白，纯度高，经检测具有抗肿瘤活性。

主权项

1.一种尖海龙抗肿瘤活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，以尖海龙为原料，粉碎后过筛，待用；第二步，在尖海龙粗粉中加入蒸馏水，匀浆、浸泡，离心后取上清液，即为尖海龙蛋白粗提液；第三步，将尖海龙蛋白粗提液减压蒸发浓缩后，加入硫酸铵粉末，充分搅拌后静置，离心，收集沉淀，将沉淀用少量蒸馏水溶解后透析、浓缩、冷冻干燥，即得到尖海龙粗蛋白；第四步，将尖海龙粗蛋白用Tris-HCl缓冲液溶解，进行离子交换层析，用梯度NaCl缓冲液洗脱，紫外检测仪于280nm波长处检测，得到数个浓度NaCl缓冲液的洗脱组分，经透析、浓缩、冻干后经体外抗肿瘤活性检测，0.3mol/L NaCl缓冲液洗脱部分具有抗肿瘤活性，即为尖海龙抗肿瘤粗蛋白；第五步，将尖海龙抗肿瘤粗蛋白用Tris-HCl缓冲液溶解后，进行凝胶过滤层析，用Tris-HCl缓冲液洗脱，紫外检测仪于280nm波长处检测，收集蛋白质洗脱液，透析、浓缩、冷冻干燥后，经体外抗肿瘤活性检测，第一个洗脱峰具有抗肿瘤活性，即获得海龙抗肿瘤活性蛋白。