[发明专利]一种用磁性纳米颗粒固定β－葡萄糖苷酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种用磁性纳米颗粒固定β－葡萄糖苷酶的制备方法，包括：(1)利用Fe²⁺和Fe³⁺的氯化物溶液和NaOH溶液进行沉淀反应，制得Fe₃O₄颗粒；(2)将壳聚糖溶解在醋酸溶液中形成均一透明的胶体溶液，再与Fe₃O₄颗粒混合搅拌，得到磁性纳米颗粒；(3)将磁性纳米颗粒加入到β－葡萄糖苷酶溶液中，经戊二醛溶液吸附－交联得到壳聚磁性纳米颗粒固定化酶；(4)分别在固定化β－葡萄糖苷酶和游离β－葡萄糖苷酶溶液中加入柠檬酸缓冲溶液，调温度后进行反应，测定其酶活性。该方法快速、简便、廉价，所得产品具有形状均一、比表面积大及酶活力回收率高等特点。

主权项

1.一种用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，包括：(1)将0.1～1M的Fe2+和Fe3+的氯化物溶液以1∶2～2∶3的体积比混合后，用1～6M的NaOH溶液在80-90℃，pH8～10下高速搅拌进行沉淀反应制得大小8～10nm的Fe3O4 颗粒；(2)将1～2g壳聚糖溶解在100～200mL质量分数为10～30％的醋酸溶液中，形成均一透明的胶体溶液，再将制备的Fe3O4颗粒加入，搅拌20～30min，得到磁性纳米颗粒，用蒸馏水反复洗涤至中性，烘干待用；(3)将制得的磁性纳米颗粒加入到β-葡萄糖苷酶溶液中，经吸附-交联得到壳聚磁性纳米颗粒固定化酶；(4)分别在0.1～0.5g固定化β-葡萄糖苷酶和游离β-葡萄糖苷酶溶液中加入0.1～0.5MpH＝3.0～9.0的缓冲溶液，20℃～80℃调温度后进行反应，每隔一周测定其酶活性。