[发明专利]一种转基因水稻制剂的制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种转基因水稻制剂的制备方法和用途，其步骤是：A.水稻特异性启动子及信号肽的获得；B.获得水稻遗传密码子的人GM－CSF基因；C.水稻基因遗传转化和高表达转基因植株的筛选；D.转基因水稻种子的加工。一种转基因水稻种子作为制备治疗或预防白细胞减少症的的药物中的应用。方法简单，成本低廉，安全性能好，疗效好，无副作用。由于重组rhGM－CSF在水稻米粉中储藏，又是人类的主要食物，制成的口服片剂不需要纯化步骤，不含任何人类的病原菌和病毒，安全可靠。利用该片剂具有刺激白细胞增殖，提高体内免疫能力，恢复因癌症的化疗和放疗导致白细胞减少而引起的免疫能力下降的作用。

主权项

1、一种转基因水稻制剂的制备方法，其步骤是：A、水稻特异性启动子及信号肽的获得：水稻储藏蛋白的醇溶谷蛋白基因家簇中的一个成员Gt13a基因在水稻胚乳细胞的蛋白质表达，这个基因成员的启动子活性，为了获得Gt13a启动子和它的信号肽序列，根据基因数据库的Gt13a的核苷酸序列，通过PCR技术获得水稻胚乳特异性的启动与信号肽；B、获得水稻遗传密码子的人GM-CSF基因：为了使重组蛋白在水稻胚乳获得表达，采用了水稻偏爱的遗传密码子，基因库里获得了成熟的GM-CSF基因的氨基酸序列，由DNA分析软件MacVector将GM-CSF基因的氨基酸序列转换成含有优化水稻遗传密码子的核苷酸序列，人工合成了人GM-CSF基因，其序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；C、水稻基因遗传转化和高表达转基因植株的筛选：利用基因枪的或农杆菌转化方法，获得的转基因水稻植株，转基因水稻经过4个月的生长和发育后，抽穗开花后，经一个月的时间，形成成熟的转基因水稻种子，当T1种子收获后，检测和筛选表达重组GM-CSF的转基因植株和产生遗传学稳定的转基因水稻品系；D、转基因水稻种子的加工：转基因水稻成熟后，收割，经谷物砻谷机去壳后形成糙米，然后将糙米碾磨成60-80目的米粉，经制片机加工成1.5克/片剂或胶囊和15克冲剂/包。