[发明专利]一种用于筛选定向进化突变酶的快速质粒营救法无效
| 申请号： | 200810047900.6 | 申请日： | 2008-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN101302559A | 公开（公告）日： | 2008-11-12 |
| 发明（设计）人： | 马向东;柯涛 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12Q1/25 | 分类号： | C12Q1/25;C12Q1/02;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉金堂专利事务所 | 代理人： | 丁齐旭 |
| 地址： | 430062湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种筛选定向进化突变酶的快速质粒营救法，可直接从加热处理或酸碱处理后再加热处理的平板中回收携带有突变基因的质粒，用于进一步的筛选和基因测序，筛选出定向进化突变酶。本发明实验过程简单，易操作。可把一轮的筛选过程缩短1－2天。大大减少人力、物力和财力的支出。本发明适合于质粒大小在3－10KB范围的载体，筛选作用温度60－100℃、pH4－10。快速定向筛选出耐高温和耐酸碱酶进化突变酶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 筛选 定向 进化 突变 快速 质粒 营救 | ||
【主权项】：
1、一种用于筛选定向进化突变酶的快速质粒营救法，其特征在于步骤为：A、将定点诱变和随机诱变的重组质粒转化大肠杆菌；B、构建目的基因的巨大突变文库；C、高温60-100℃处理(10-30分钟)构建的突变基因文库；或者酸碱pH4～10处理(10-15分钟)后，再高温60-100℃处理(10-30分钟)构建的突变基因文库；D、直接挑选在高温条件下有酶活的转化子的部分死亡菌体；E、将挑出的少量死亡的菌体和大肠杆菌的高效感受态细胞进行混合，采用快速转化的方法进行转化；F、最后对转化子进行鉴定直到获得目的突变子。
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