[发明专利]一种同时快速检测沙门菌和志贺菌的方法

摘要

本发明属于食源性致病菌的快速检测技术，具体说是一种对沙门菌和志贺菌同时进行检测的环介导等温DNA扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)检测方法。包括由样品处理试剂、LAMP反应试剂、Bst DNA聚合酶的大片段、琼脂糖、溴酚蓝上样缓冲溶液、溴化乙锭溶液组成的试剂的配制，以及扩增产物的检测和沉淀产生的检测程序。其步骤是：首先设计特异性引物；其次是提取样品DNA；第三是配制反应体系。该法较之目前采用的传统细菌培养方法、免疫检测方法和其它分子生物学方法具有操作简单、快速、无需特殊仪器试剂且灵敏特异的优点。可应用于食品和其它样品中沙门菌和志贺菌的同时快速检测。

主权项

1.一种同时检测沙门菌和志贺菌的环介导等温DNA扩增方法，包括设计沙门菌invA基因和志贺菌ipaH基因特异性引物，其特征在于，其中沙门菌引物如下：invA-F3：5′-GCGATAATATGGGGCGGAAT；invA-B3：5′-CGCCTTTGCTGGT TTTAGGT；invA-FIP：5′-TCCCGGCAGAGTTCCCATTGAAATCATGACGCAGCTGTTGAA；invA-BIP：5′-TTCCCGCTGCCGGTATTTGTTGCTACGTTTTGCTTCACGGA；invA-LB：5′-GCCGTAACAACCAATACAAATGG；invA-LF：5′-TATTCGGTGGTTTTAAGCGTACTC；志贺菌引物为：ipaH-F3：5′-GCCTTTCCGATACCGTCTCT；ipaH-B3：5′-TGATGGACCAGGAGGGTT；ipaH-FIP：5′-TCCGCAGAGGCACTGAGTTTTTCACGCAATACCTCCGGATTC；ipaH-BIP：5′-TCGACAGCAGTCTTTCGCTGTTCCGGAGATTGTTCCATGTGA；ipaH-LB：5′-TGCAGCGACCTGTTCACG；ipaH-LB：5′-CTGCTGATGCCACTGAGAGC。