[发明专利]单条植物线虫核糖体内部转录间隔区序列套式PCR扩增方法无效
| 申请号： | 200810052041.X | 申请日： | 2008-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN101230343A | 公开（公告）日： | 2008-07-30 |
| 发明（设计）人： | 王金成;黄国明;郭京泽;杨秀丽;刘鹏 | 申请（专利权）人： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/30;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 天津市鼎和专利商标代理有限公司 | 代理人： | 李凤 |
| 地址： | 300457*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及套式PCR技术扩增单条植物寄生线虫核糖体rDNA转录间隔区(Internal Transcribed Spacer，ITS)的核酸序列，属于植物寄生线虫检测领域。本发明筛选了3条引物，建立了套式PCR扩增技术，包括2套不同的PCR扩增体系和2套不同的PCR扩增程序，免去了引物大量合成的成本和管理保存的麻烦。本发明的有益效果是：所涉及的技术成熟、操作简单，所用引物少，目前只有3条就基本解决问题，与实时荧光PCR技术相比，该技术成本低，操作简单，可重复性强，假阳性结果出现概率低，可用于单条植物寄生线虫幼虫或通过常规PCR无法扩增的单条植物寄生线虫ITS核酸序列的扩增。非常适合于口岸日常检疫鉴定使用。 | ||
| 搜索关键词： | 植物 线虫 核糖体 内部 转录 间隔 序列 pcr 扩增 方法 | ||
【主权项】：
1.单条植物线虫核糖体内部转录间隔区序列套式PCR扩增方法，其特征是，它包括以下步骤：(1)单条植物寄生线虫DNA的提取技术；(2)所用引物的筛选，序列如下：P1：5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’P2：5’-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3’P3：5’-GATTACGTCCCTGCCCTTTGT-3’(3)套式PCR扩增第一步的扩增体系和扩增程序；(4)套式PCR扩增第二步的扩增体系和扩增程序。
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