[发明专利]杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺无效
| 申请号： | 200810052527.3 | 申请日： | 2008-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN101544964A | 公开（公告）日： | 2009-09-30 |
| 发明（设计）人： | 郭梅;路福平;李托平;蒲军;王娜;梁鹏;白东清 | 申请（专利权）人： | 天津农学院 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12R1/84 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆 艺 |
| 地址： | 300384*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，步骤为：(1)准备基因工程菌甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lcc1和发酵培养基；(2)将活化的菌株接种在经灭菌的发酵培养基中，在25～31℃，振荡或搅拌培养15-36h；(3)间歇或流加含生物素的甲醇进行诱导培养，使甲醇终体积浓度为0.2～2.0％，温度15～30℃，诱导时间96～216h，得到杂色云芝重组漆酶，本发明的工艺，不需更换培养基，进行直接诱导培养，确定了发酵工艺参数，建立了一种操作简便、污染率低、成本低、发酵周期短、漆酶表达量高的发酵工艺。 | ||
| 搜索关键词： | 杂色 云芝漆酶 甲醇 酵母 中异源 表达 发酵 工艺 | ||
【主权项】：
1. 杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征是包括如下步骤：(1)准备菌株和培养基菌株：基因工程菌甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lcc1；发酵培养基：15～30g/L蛋白胨，5～30g/L葡萄糖，5～20g/L酵母粉，10～25g/L酵母氮源，3×10-4～7×10-4g/L生物素，0.1～0.6mmol/L的Cu2+，用pH为4.0～7.0的浓度为100mmol/L的磷酸盐缓冲液配制；(2)基因工程菌生长培养将活化的菌种甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lcc1接种在经灭菌的所述发酵培养基中，在温度25～31℃下，振荡或搅拌培养15-36h；(3)基因工程菌的诱导培养间歇或流加含3×10-4～7×10-4g/L生物素的甲醇进行诱导培养，使甲醇终体积浓度为0.2～2.0％，温度15～30℃，诱导时间96～216h，得到杂色云芝重组漆酶。
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