[发明专利]一种抗鸡新城疫病毒转移因子的制备方法

摘要

本发明公开了一种天然高效纯生物活性物质抗鸡新城疫病毒转移因子的制备方法。本发明按照以下步骤进行：将鸡新城疫病毒接种于10天龄鸡胚尿囊液制备病毒抗原；提取病毒抗原；用上述提取的病毒抗原免疫猪；从免疫猪中提取抗鸡新城疫病毒转移因子。因此使用本发明的转移因子可以起到预防鸡新城疫病毒感染、能够保护正常机体细胞免受鸡新城疫病毒侵害的作用，从而降低发病率。

主权项

1.一种抗鸡新城疫病毒转移因子的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：(1)制备病毒抗原：将鸡新城疫病毒接种于10天龄鸡胚尿囊液，33℃下48-72小时，取鸡胚尿囊液，装厚壁小瓶子内，超声打碎，5000rpm离心20分钟，弃去沉渣留上清；(2)提取病毒抗原：取离心上清，然后不连续梯度密度离心纯化提取病毒抗原；将病毒抗原离心后，取上清液装入以15％、30％、45％及60％的蔗糖制备的不连续梯度密度离心管，超速离心，110,000-165,000转/分3小时，根据鸡新城疫病毒所在离心管位置，吸出鸡新城疫病毒备用；(3)用上述提取的病毒抗原免疫猪：挑选健康的猪，取制备的病毒抗原，用上述提取病毒抗原皮下多点注射免疫猪，共免疫4次，前两次分别以完全佛氏佐剂及不完全佛氏佐剂混合抗原，以高速组织匀浆机打匀，在动物皮内或皮下多点注射免疫，第3次和第4次后在动物的肌肉或静脉注射，每次免疫间隔一周，最后一次免疫7-10天后取动物静脉血，以免疫荧光方法或ELISA方法检测上述病毒的特异性抗体效价，出现病毒特异性免疫效价后，宰杀动物，取脾脏和胸腺于冰上，转移至-20℃保存，备用；(4)从免疫猪中提取抗鸡新城疫病毒转移因子：①原材料的制备及预处理：将病毒免疫接种猪的脾及淋巴结组织，用冷三蒸水洗净猪脾，去其表面的筋膜、脂肪等组织，再灭菌生理盐水反复冲洗；②破碎：将洗干净的猪脾脏剪碎，加入2倍体积的冷生理盐水，在冰冻的条件下用高速组织捣碎机以1000r/min捣碎3次，每次3min，制得匀浆液；③冻融：将匀浆液置于-80℃快速冷冻，水浴30℃中融化，交替冻融4-6次，每次融化后均以组织匀浆机高速匀浆粉碎；④提取：加入3倍体积的冷生理盐水，置于冰冻离心机于5℃以4000r/min离心30分钟，取上层血红色液体，再用G2砂心漏斗过滤，取滤液；⑤超滤：将上述滤液用截流值为6000道尔顿的中空纤维超滤膜加压超滤，滤液为分子量小于6000道尔顿的转移因子；⑥除菌：将超滤得到的滤液用孔径为0.22um的滤膜加压过滤除菌；⑦分装：4℃密封保存，即得所述的抗鸡新城疫病毒转移因子提取液。