[发明专利]转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法及应用无效
| 申请号： | 200810053756.7 | 申请日： | 2008-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN101358191A | 公开（公告）日： | 2009-02-04 |
| 发明（设计）人： | 王建祥;刘向荣;王敏;饶青;邢海燕 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/867;C12N5/10;G01N15/10;G01N21/64;G01N21/78;G01N33/53;C12Q1/68;A01K67/027 |
| 代理公司： | 天津才智专利商标代理有限公司 | 代理人： | 王晓红 |
| 地址： | 300020*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法及应用，包含AML1a基因的逆转录病毒载体的构建、逆转录病毒的制备、骨髓细胞的感染、小鼠骨髓移植和模型鉴定。本发明采用分子生物学、细胞生物学等方法转导了AML1a基因至小鼠骨髓细胞中，成功建立了具有双表型的T－淋巴细胞白血病的模型，为进一步阐述白血病的发病机制以及靶向治疗奠定了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 转导 aml1a 基因 淋巴细胞 白血病 小鼠 模型 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1、一种转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法，包括以下步骤：1)载体构建：自pCDNA3-FLAG-AML1a中，PCR扩增FLAG-AML1a，连接入pMD18-T Simple载体中，转化E.coli DH5菌株，进行蓝白斑筛选，挑取阳性克隆提取质粒经XhoI双酶切鉴定后测序，测序正确的克隆，经XhoI酶切得到FLAG-AML1a片段，pMSCV-IRES-YFP经XhoI酶切，CIAP去磷酸化，与自pMDsimple-T-FLAG-AML1a载体XhoI酶切纯化所得的FLAG-AML1a片段连接，转化DH5α感受态细胞后挑取克隆，EcoI酶切鉴定已插入目的片段正反向，正向插入的质粒命名为pMSCV-FLAG-AML1a-IRES-YFP；2)病毒制备：逆转录病毒载体质粒pMSCV-FLAG-AML1a-IRES-YFP或pMSCV-IRES-YFP分别与辅助质粒pV Pack-Eco和pV Pack-GP组合，辅助质粒pV Pack-Eco含Env，pV Pack-GP含gal-pol，组合通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞，制备逆转录病毒，病毒感染3T3细胞，检测病毒滴度，并测定AML1a的表达情况；3)骨髓细胞的感染：C57雄性小鼠的骨髓单个核细胞置于含mSCF、mIL-3、mIL-6的IMDM培养液中培养，加入ploybrene进行三轮逆转录病毒转导；4)将转导了AML1a基因的小鼠骨髓单个核细胞经尾静脉注射至经137Cs致死剂量照射的C57雌性小鼠体内，建立转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型；5)模型鉴定。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国医学科学院血液学研究所，未经中国医学科学院血液学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200810053756.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
