[发明专利]滇紫草细胞的超低温冻存方法

摘要

本发明涉及一种滇紫草细胞超低温冻存保藏的方法。其操作步骤主要包括：1.细胞冻存前预处理和脱水过程；2.细胞在液氮中的冻存阶段；3.冻存细胞的解冻过程；4.细胞解冻后的复苏培养。利用该超低温冻存方法对滇紫草细胞进行保藏，细胞解冻后可以获得较高的存活率，是保存滇紫草种质资源的有效手段。

主权项

1.一种滇紫草细胞超低温冻存方法，其特征在于该方法的操作步骤包括：1)滇紫草细胞的继代培养：用继代培养基，培养条件为固体培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养；2)滇紫草细胞超低温处理前的预培养：将继代培养8-11天的细胞转移至含5-10％二甲亚砜的继代培养基上预培养4-8天；3)脱水处理：以甘油15-30％、乙二醇10-20％、二甲亚砜5-10％、MS基础培养基余量和蔗糖0.3-0.6mol/L为组分，配成冷冻保护剂，将细胞放入15-25℃冷冻保护剂中处理15-30min，然后在0℃预冷30min；4)冷冻过程：将预冷好的细胞和冷冻保护剂一块投入液氮中冻存；5)解冻过程：从液氮中取出冻存细胞，在10-25℃水浴中进行解冻，然后用含0.5-1.0mol/L蔗糖浓度MS培养基对细胞进行洗涤，去除冷冻保护剂；6)细胞的复苏：解冻后，经过洗涤的细胞转入继代培养基中进行恢复培养。