[发明专利]一种长白落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法

摘要

一种长白落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，它涉及一种松树离体培养不定芽诱导植株再生的方法。它解决了长白落叶松组织培养器官发生困难、植株再生率低，及目前用长白落叶松的成熟胚、花芽和腋芽、幼嫩茎段作为外植体不定芽诱导率低的问题。方法：1.合子胚培养诱导愈伤组织；2.诱导生长不定芽；3.继续培养并诱导生根，即得到长白落叶松离体再生植株。本发明以长白落叶松成熟种子为外植体进行不定芽诱导，获得了高诱导率的不定芽，比目前已有不定芽诱导技术提高9倍以上，而且愈伤组织诱导率均高于90％，对于长白落叶松的大量扩繁和基因工程育种研究具有广泛的应用价值。

主权项

1.一种长白落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于长白落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法按以下步骤实现：一、取经过预处理的长白落叶松合子胚接种于额外添加6-苄基氨基嘌呤、肌醇、谷氨酰胺、水解酪蛋白、琼脂和蔗糖的BM培养基中，在温度为24±1℃的环境中进行暗培养或光照培养至出现愈伤组织；二、将愈伤组织置于温度为24±1℃的环境中进行光照培养，至长出不定芽；三、将带有不定芽的愈伤组织切成块放入额外添加活性碳和赤霉素的BM培养基中进行光照培养，4周之后继代培养一次，诱导生根，即得到长白落叶松离体再生植株；步骤一、二和三中光照培养都在30～40μmol/m2·s的条件下进行；步骤一BM培养基中6-苄基氨基嘌呤的浓度为1.0～4.0mg/L、肌醇的浓度为1g/L、谷氨酰胺的浓度为1g/L、水解酪蛋白的浓度为500mg/L、琼脂的浓度为6g/L、蔗糖的浓度为30g/L；步骤二中愈伤组织所用培养基与步骤一所用培养基相同；步骤三BM培养基中活性碳的加入量为BM培养基质量的1％、赤霉素的浓度为1.0mg/L。