[发明专利]一种从鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法

摘要

本发明提供一种新的从鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，包括粉碎、超声波提取、高速离心分离、超滤、离子交换层析、超滤、凝胶色谱纯化、超滤、冷冻干燥等步骤，通过提高粉碎程度，提取效率高，收率超过4000ng/g鲜鹿茸。通过在离子层析过中分别采用不同浓度的NaCl/不同pH值的缓冲溶液梯度洗脱，使得IGF-1和其他组分如杂蛋白分离得更彻底，冻干粉中IGF-1含量可达1500-2000ppm；联用凝胶排阻色谱柱纯化，产品纯度达98％以上，可用于药品。

主权项

1、一种从鹿茸提取胰岛素样生长因子IGF-1的方法，其特征是包含如下步骤：(1)、粉碎：取鲜鹿茸，在低温下粉碎，温度4-10℃，过80目筛；(2)、超声波提取：将粉碎后的鹿茸用体积/重量为3-10倍的pH9-12的缓冲液进行提取，优选pH10的缓冲液，优选5-9倍，最优选7倍；温度4-30℃，优选10-25℃，最优选20℃；时间10-60min，优选15-30min，最优选15-20min；提取1-2次；(3)、高速离心分离：提取液于高速离心机中5000-10000转离心20min，沉淀部分加入2-5倍的缓冲液，重复上述操作，合并两次离心所得上清液；(4)、超滤：将上清液用膜进行超滤，去除小分子物质和大分子物质，并对上清液进行浓缩，得浓缩液，膜的截留值为1-100kDa，优选6-20kDa；(5)、离子交换层析：将超滤上清液调pH至5-7，优选6.8，上阳离子交换柱，梯度洗脱，先用pH5-7，优选6.8，的缓冲液洗脱，优选磷酸盐缓冲液，再用含0.4-0.6mol/l(优选0.5mol/l)的NaCl的pH5-7(优选pH6.8)缓冲溶液(优选磷酸盐缓冲液)，再用含0.7-0.9mol/lNaCl(优选0.8mol/l)的pH 7-8(优选pH7.6)缓冲溶液(优选磷酸盐缓冲液)梯度洗脱，再用含0.9-1.1mol/l的NaCl(优选1.0mol/l)的pH 8-10(优选9.0)缓冲溶液(优选Tris-HCl缓冲液)梯度洗脱，收集胰岛素样生长因子IGF-1的峰；离子交换层析柱优选CM Sephadex C-50柱；(6)、超滤：用1-100kDa(优选2-6kDa)的超滤膜将步骤(5)得到的胰岛素样生长因子-1洗脱液进行脱盐、浓缩，收集洗脱液；(7)、冷冻干燥：将步骤(6)所得浓缩液进行冷冻干燥，得到冻干粉。