[发明专利]一种联合限制性酶切法和质谱法以检测SNP的方法有效

专利信息
申请号: 200810085029.9 申请日: 2008-03-14
公开(公告)号: CN101251510A 公开(公告)日: 2008-08-27
发明(设计)人: 赵洪斌;马庆伟;于中连;吕芳;吕萍萍 申请(专利权)人: 毅新兴业(北京)科技有限公司
主分类号: G01N27/64 分类号: G01N27/64;C12Q1/68
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 100080北京市海淀区苏*** 国省代码: 北京;11
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明提供一种联合特殊限制性内切酶和质谱法方法来检测单核苷酸多态性的新方法。本发明要点在于参与PCR反应的引物含特殊限制性内切酶的不同位置的识别位点和酶切位点,通过对PCR产物进行限制性内切酶消化,产生含SNP位点的单链核苷酸片段,并通过纯化、点靶等步骤,制备可直接用于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测的样本。与现有方法相比,本发明具有存在耗时短长、成本低、分辨率高、操作简便的优点。
搜索关键词: 一种 联合 限制性 酶切法 质谱法 检测 snp 方法
【主权项】:
1.一种联合限制性酶切法和质谱法以检测单核苷酸多态性的方法,包括以下步骤:(1)确定SNP位置:针对待检核酸序列可能存在的SNP,确定SNP在待检序列中的位置;(2)设计正向引物:根据SNP的位置,设计正向引物,其中正向引物3’端位于SNP位点5’端上游1-47bp处,正向引物5’端含有一种特殊限制性内切酶的识别位点,而在待检核酸序列中,所述的特殊限制性内切酶的酶切位点位于识别位点3’端下游1-25bp处,并位于SNP的5’端上游1-25bp的范围内,其中,所述的位置范围取决于具体的限制性内切酶;(3)设计反向引物:根据SNP的位置,设计反向引物,其中反向引物位于另一条核酸互补链上的SNP位点5’端上游1-47bp处,反向引物5’端含有同一种特殊限制性内切酶的识别位点,而在待检核酸序列中,所述的特殊限制性内切酶的酶切位点位于识别位点3’端下游1-25bp处,并位于SNP的5’上游端1-25bp的范围内,其中,所述的位置范围取决于具体的限制性内切酶;(4)PCR扩增:通过PCR扩增,获得包含两个特殊限制性内切酶的识别位点、两个酶切位点、SNP位点的双链扩增产物,其中SNP位点位于正向引物限制性内切酶酶切位点和反向引物限制性内切酶酶切位点之间;(5)限制性内切反应:使用所述的特殊限制性内切酶分别进行限制性内切反应,获得两条包含SNP位点的单链短片段;(6)质谱检测:将包含SNP的单链短片段进行质谱检测,通过与野生型单链短片段的分子量进行比较,确定SNP的基因型。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于毅新兴业(北京)科技有限公司,未经毅新兴业(北京)科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/200810085029.9/,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top