[发明专利]一种支原体检测的报告基因扩增试剂盒

摘要

细胞培养的支原体污染难题和各种支原体感染诊断急需可靠、高效的试剂盒。支原体培养加荧光染色法可靠，但费时费事，培养物还加剧污染。常规检测支原体就扩增支原体基因的直接PCR方法易交叉污染，假阳性高只作为辅助参考。本发明涉及支原体保守基因通过杂交探针交联植物拟南芥LEY序列为报告基因DNA，再扩增报告基因间接检测。其特征在于将支原体16sRNA与首尾带支原体保守序列探针的LEY报告基因DNA的首尾部位杂交，经耐热连接酶催化报告基因DNA成环，再反向PCR扩增环状报告基因，间接反映支原体的检测。调节连接酶反应，交叉污染不易杂交报告基因，也就减少了假阳性；如果系统污染了，还可换一套报告基因。

主权项

1“一种支原体检测的报告基因扩增试剂盒”将支原体保守16sRNA基因通过杂交探针交联一无关的报告基因，再扩增报告基因间接检测。其特征在于预设两段与待测支原体16sRNA互补的短序列为探针序列，两探针序列相邻，且碱基连续。将两段探针分别连接在一段无关的报告基因首尾末端，带探针的报告基因可通首尾探针序列与待测模板互补杂交，从而其首尾末端靠近衔接，杂交体单链缺口被耐热连接酶循环催化连接，使报告基因DNA成环，再采用报告基因中间的序列为引物，反向扩增含探针的环状报告基因。如果没有特异性待测基因帮助，报告基因不能成环，也就不能反向PCR扩增。