[发明专利]一种用昆虫卵建立细胞系的方法

摘要

一种用昆虫卵建立细胞系的方法，步骤如下：1)将产下90～100小时的昆虫受精卵片用次氯酸钠溶液或甲醛溶液浸泡后再消毒；2)处理后的卵粒倒入昆虫细胞培养液中，逐一挤压卵粒释放出胚胎；3)将胚胎剪碎成组织块放入培养箱中培养；4)加入细胞培养液继续培养；5)定时更换培养液，直至增殖的细胞充满整培养瓶；6)吸出半量的细胞培养液，其中含有新增殖出的单个细胞，放入新培养瓶中并加入等量的新细胞培养液，继续放回培养箱中培养；7)周期重复步骤5)及6)，细胞开始传代，细胞系建立成功；整过程在无菌下进行。所述的昆虫卵可以是鳞翅目昆虫卵；本发明方法由传统耗时1.5-2年缩减到1-3个月，优势非常明显，且重复性很强。

主权项

1、一种用昆虫卵建立细胞系的方法，方法步骤如下：1)将产下90—100小时的昆虫受精卵片用次氯酸钠溶液或甲醛溶液浸泡5一10分钟后用无菌水清洗，再将卵粒用乙醇溶液消毒后用生理盐水Ringer’s清洗；2)将上述步骤处理后的卵粒倒入昆虫细胞培养液中，逐一轻挤压卵粒释放出胚胎；3)将步骤2)得到的胚胎剪碎成组织块，转入密闭培养瓶中，放入25～28℃无光照的细胞培养箱中培养20～30小时；4)加入细胞培养液，使胚胎的组织块完全或超半部分浸没在该培养液中，在与步骤3)同样条件下培养；5)每7—15天更换培养液，直至观察到不断扩展并开始增殖的细胞充满了整个培养瓶；6)从培养瓶中吸出半量的细胞培养液，其中含有新增殖出的单个细胞，放入新培养瓶中，并加入等量的新细胞培养液；而原培养瓶中再加入同吸出量同样多新的细胞培养液；将两个培养瓶再放回培养箱中与步骤3)同样条件下培养；得到昆虫胚胎第一代传代细胞，细胞系建立成功；整个过程都是在无菌条件下进行的。