[发明专利]一种酪氨酸酶模拟酶的制备方法

摘要

一种酪氨酸酶模拟酶的制备方法，它是以β－环糊精为模型，在制备得到环糊精双组氨酸衍生物的基础上，将其与Cu2+络合得到具有天然酶活性的酪氨酸酶模拟酶，可催化氧化酪氨酸生成二羟基苯丙氨酸；与现有技术相比，它具有催化活性高，不会失活等特点。

主权项

1 一种酪氨酸酶模拟酶的制备方法，该方法是：A)将环糊精按质量比1∶15～25加入干吡啶中溶解，然后按环糊精与邻-碘酰基苯甲酸的摩尔比为1∶0.2～0.4逐滴加入间苯二磺酰氯；在25℃下反应1小时，停止反应，在低于25℃条件下减压蒸除吡啶，浅褐色残余物在液氮保护下在低于25℃下真空干燥，得到的粗产物按质量比1∶8～15溶于40％质量百分比浓度的乙醇水溶液中，滤去不溶物后按质量比1∶8～15逐滴加到83％质量百分比浓度的乙腈水溶液中，抽滤，除去白色沉淀，在30℃下减压蒸除溶剂，残留物溶于适量20％质量百分比浓度的乙醇水溶液中，搅拌1小时，在30℃下蒸除溶剂，在20～30℃下真空干燥即得到6位双取代环糊精磺酸酯；B)将6位双取代环糊精磺酸酯按质量比为1∶30～50加入到N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解；然后按6位双取代环糊精磺酸酯与碘化钠的质量比为1∶1～1.5加入碘化钠，在60～90℃下搅拌反应2～45h，在40℃下减压蒸干N，N-二甲基甲酰胺；在产物中加入丙酮，搅拌、过滤，收集滤饼再加入丙酮，重复三次，除去未反应的碘化钠；将所得固体溶于水中，加入丙酮得到沉淀，在40～45℃下真空干燥即得到双碘代环糊精；C)将双碘代环糊精按质量比为1∶10～15加入到N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解；然后按双碘代环糊精与组氨酸的质量比为1∶0.8～1.5加入组氨酸，在80℃下反应24小时；将反应得到的悬浊液抽滤，收集滤液，在40℃下减压蒸馏去除溶剂，所得黄色蜡状物用丙酮洗至丙酮变无色；所得固体溶于水中并重新用丙酮沉淀，收集沉淀物、干燥后即得到环糊精双组氨酸衍生物；D)将环糊精双组氨酸衍生物按质量比为1:500～2000投入PH值为7～9的磷酸盐缓冲液中，待完全溶解后，按环糊精双组氨酸衍生物与硫酸铜的摩尔比为1∶1～5加入硫酸铜，过滤，除去不溶物，加入适量丙酮，静置，析出晶体，用丙酮洗涤，在20～40℃下干燥，得到酪氨酸酶模拟酶。2 根据权利要求1所述的酪氨酸酶模拟酶的制备方法，其特征在于所述的环糊精为β-环糊精。