[发明专利]一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法

摘要

本发明公开了一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法，包括将收集的永生化猪肝细胞接种至转瓶中，经三层转瓶培养系统中旋转培养，用1.5-2.0％浓度的海藻酸钠溶液调整永生化猪肝细胞的浓度为1-2.5×10⁶个/mL；再调整浓度后得到的永生化猪肝细胞，采用一步法海藻酸-壳聚糖制备永生化猪肝细胞微囊；本发明还公开了一种微囊化永生化猪肝细胞。本发明提供的微囊化永生化猪肝细胞，可作为肝细胞源应用于生物型人工肝或肝细胞移植，本发明制备出的抗HCMV gBn1抗体，其优点为特异性强、灵敏度高。

主权项

1、一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法，其特征依次包括以下步骤：(1)将收集的永生化猪肝细胞接种至含有10％胎牛血清的180-250mlDMEM的Bellco转瓶中，置于37℃、5％CO2的3L三层转瓶培养系统中旋转培养，转速为1转/分；待细胞长满汇合后，永生化猪肝细胞经过消化、收集、离心、弃上清后，制成细胞悬液，计数细胞活率；用1.5-2.0％浓度的海藻酸钠溶液调整永生化猪肝细胞的浓度为1-2.5×106个/mL，冰浴中备用；(2)在无菌环境下进行，用步骤(1)中调整浓度后得到的永生化猪肝细胞，采用一步法海藻酸-壳聚糖制备永生化猪肝细胞微囊；将永生化猪肝细胞微囊转移至Bellco转瓶中，并加入含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养液180-250ml，置于37℃、5％CO2的3L三层转瓶培养系统中旋转培养，转速为1转/分；每间隔2-4天，用100-200目的细胞筛网过滤培养中的微囊细胞，更换培养基后继续培养；直至培养14天后，收集微囊化永生化猪肝细胞。