[发明专利]固定化耐冷菌的制备方法

摘要

固定化耐冷菌的制备方法，它涉及一种耐冷菌的制备方法。本发明解决了现有技术分离出的菌体在低温时生长缓慢、处理污水中的有机污染物去除率低的问题。本发明方法如下：一、菌种的培养和驯化；二、耐冷菌的筛选；三、耐冷菌的固定。本发明的固定化耐冷菌在低温环境下对COD的去除率比中温菌高出63.67％，同时固定化耐冷菌在中温环境下对COD去除率比固定化耐冷菌在低温环境条件下的COD去除率高出6.02％。本发明的固定化耐冷菌在冬季对污水的COD平均去除率为85.79％，全年COD去除率平均值为86.66％，本发明的固定化耐冷菌没有因为在冬季温度较低而失去活性。

主权项

1、一种固定化耐冷菌的制备方法，其特征在于固定化耐冷菌的制备方法如下：一、菌种的培养和驯化：将冬季污水处理系统的曝气池中的污泥放入温度为15℃的低温生化培养箱中，通入由生活污水与模拟污水按1∶1-3的体积比组成的混合污水，然后在污泥的浓度为2.0-3.0g/L、溶解氧为2-4mg/L的条件下对污泥进行闷曝8-10h，再静沉2-4h，然后每天换水1次再排出1/3上清液，运行2-4天后排出全部上清液，然后在水力停留时间为6-8h，静沉时间为2-4h的条件下，将低温生化培养箱的温度降到10℃运行8-10天，再降到8℃运行8-10天，最后降到4℃运行8-10天，然后分离、纯化菌株，即完成菌种的培养和驯化；二、耐冷菌的筛选：将步骤一得到的菌株分别按8-15％的接种量接种于LB培养液中，在温度为3-8℃、转速为100-120转/分的条件下培养1.5-3天，经过两次转接后再以8-15％接种量接种于生活污水所占体积比为8-15％的LB培养液中得到菌液，将得到的菌液以8-15％接种量接种于发酵罐中得到悬浮液，然后在温度为10-15℃、pH值为7.0-8.0、转速为120-130转/分、溶氧为1∶1的条件下活化培养，选择对数生长期悬浮液的OD585吸光值为1.4-1.6的菌株，然后在转速为4000-6000转/分的条件下离心15-25min，然后弃去上清液后，将离心后得到的沉淀物用磷酸缓冲液清洗两遍、生理食盐水清洗三遍后，再在转速为4000-6000转/分的条件下离心15-25min，然后弃去上清液，即完成耐冷菌的筛选；三、耐冷菌的固定：将步骤二筛选出的耐冷菌制成质量浓度为8-10％的耐冷菌悬浮液，将得到的耐冷菌悬浮液与质量浓度为8-10％、海藻酸钠含量为0.016g/L的聚乙烯醇水溶液在温度为20-25℃的条件下按照1∶1的体积比混合，然后将混合后的溶液与聚氨酯泡沫填料按照1∶3的体积比混合，然后静置1-2h得到包埋耐冷菌的聚氨酯泡沫载体，再将包埋耐冷菌的聚氨酯泡沫载体放入CaCl2含量为0.016g/L、pH值为6.7的饱和硼酸溶液中浸泡，然后在24h内每间隔7-9h搅拌一次，再用生理食盐水冲洗三次和自来水冲洗三次即得固定化耐冷菌；其中步骤一所述的模拟污水是由10L自来水、3.0-5.0g葡萄糖、0.2g KH2PO4、2.0g NH4Cl、6.0g NaHCO3、0.15gMgSO4、0.014g CaCl2·2H2O和3.0mL微量元素营养液组成，其中微量元素营养液由1L蒸馏水、1.54g FeCl3·6H2O、0.15gH3BO3、0.03g CuSO4·5H2O、0.18gKI、0.12gMnCl2·4H2O、0.06g Na2MoO4·2H2O、0.12g ZnSO4·7H2O、0.15gCoCl2·6H2O和10.0g EDTA组成。