[发明专利]产氢细菌的特异性快速检测方法

摘要

产氢细菌的特异性快速检测方法，它涉及一种细菌的快速检测方法。它解决了现有产氢细菌的检测方法存在无法准确检测未培养的产氢细菌、检测不具有特异性及误差较大的问题。方法：一、取活性污泥，然后采用DNA抽提试剂盒提取活性污泥DNA，并储存；二、采用[Fe]-氢化酶特异性引物对活性污泥DNA进行PCR扩增；三、切取扩增得到的目的条带，然后采用DNA纯化试剂盒进行DNA的纯化；四、纯化得到的DNA采用变性梯度凝胶电泳分离，再对克隆测序得到基因序列进行分析，即完成产氢细菌的特异性快速检测。本发明避免了非产氢细菌对检测的干扰，且实验结果误差小，准确可靠，特异性强，可在36～48h内检测出产氢细菌。

主权项

1、产氢细菌的特异性快速检测方法，其特征在于产氢细菌的特异性快速检测方法按以下步骤实现：一、产氢反应器运行后每隔3～7天取出18～22mL的活性污泥，然后采用DNA抽提试剂盒提取活性污泥DNA，并置于-20℃的条件下储存；二、采用[Fe]-氢化酶特异性引物对活性污泥DNA进行PCR扩增，退火温度为50～55℃，扩增循环数为30～35；三、切取扩增得到的目的条带，然后采用DNA纯化试剂盒进行DNA的纯化；四、将纯化得到的DNA采用变性梯度凝胶电泳分离，然后克隆测序得到基因序列，再通过GenBank进行相似性检索和对比，或者采用phylip软件包对相似序列的对比及系统发育进化树的绘制，最后通过Treeview软件将进化树输出，进行分析，即完成产氢细菌的特异性快速检测；其中步骤二中[Fe]-氢化酶特异性引物为上游引物F15’-GCCGACCTKACMATMATGGA-3’，下游引物R15’-ATRCARCCRCCSGGRCAGGCCAT-3’；步骤二中PCR扩增的反应体系如下：10×PCR Buffer(Mg2+) 2μLdNTPs(10mmol/L) 1.6μL上游引物(10μmol/L) 0.5μL下游引物(10μmol/L) 0.5μLTaq E(2. 5U/μL) 0.2μL活性污泥DNA模板(50μg/L) 2μL补足dH2O 至20μL。