[发明专利]应用流式细胞术检测病毒载体类基因治疗药物感染滴度

摘要

本发明公开了一种流式细胞术检测病毒载体类基因治疗药物感染滴度的方法。首先建立了模拟病毒感染细胞特点的基于泊松分布的数学模型，并且确定了相应计算方法。具体实施步骤为：细胞铺六孔板，待细胞长满后选择一孔计数，病毒感染细胞，培养一定时间后消化，收集细胞，将收集的细胞依次固定，渗透化，封闭，一抗孵育，FITC标记的二抗孵育，用流式细胞仪检测，将所得结果根据所建立的数学模型做曲线拟合，结果判定。将该方法与传统方法如噬斑法，免疫荧光法做对比，证实该方法更准确，精密度高，而且不受细胞状态和病毒感染细胞后培养过程中细胞分裂的影响。该方法的建立对于此类产品的质量控制和临床应用有重要意义。

主权项

1. 一种应用流式细胞术检测病毒载体类基因治疗药物感染滴度的方法，其特征在于：建立了模拟病毒感染细胞特点的数学模型和相应的结果计算方法，具体步骤为：1)根据泊松分布原理，在某一MOI(multiplicityofinfection，即病毒和细胞数量比值)下，细胞被感染的阳性百分数为：％INF＝100×(1-e-MOI)；2)设病毒样品中实际的感染滴度为m，实验前由于m未知，假定其滴度为n，m＝B×n，根据血球记数仪得到的细胞总数，结合假定值n将样品做成不同稀释度，即得到不同的MOIn，由于m＝B×n，则MOI＝B×MOIn，将其代入上式，同时被感染的细胞中有一定比例由于状态不好，不能表达大量病毒蛋白，或由于染色时不均一产生假阴性，需引入一个参数A，即：，此即为确定的数学模型；3)结果计算方法：通过曲线拟和得到B值，那么实际的病毒感染滴度m＝B×n。