[发明专利]体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法

摘要

一种体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法，包括四步诱导法把人骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞，其中主要的诱导液中首次采用胎猪胰腺提取液和醋酸锌的诱导成分，分化为胰岛样细胞的胰岛素分泌量显著提高。该方法得到的胰岛样细胞有望突破目前糖尿病的技术难题，适用于实验研究以及以后的规模化生产。

主权项

1.一种体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤1)将第4代人骨髓间充质干细胞用α-MEM和质量百分数为10％胎牛血清完全覆盖培养皿底，培养至70％长满培养皿底备用；2)吸除α-MEM和质量百分数为10％胎牛血清培养液，加含4mmol/L β-巯基乙醇的高糖至完全覆盖培养皿底，将培养皿置于37℃、5％CO2和饱和湿度的培养箱内诱导1小时；3)吸除含4mmol/L β-巯基乙醇的高糖溶液，再加含10ng/mL表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子，质量百分数为2％B27和4％胎猪胰腺提取液的高糖至完全覆盖培养皿底诱导4～6天；4)吸除含10ng/mL表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子，质量百分数为2％B27和4％胎猪胰腺提取液的高糖溶液，再加入含10ng/mL表皮生长因子和肝细胞生长因子，10mmol/L烟碱，25μmol/L醋酸锌，质量百分数为2％胎牛血清和4％胎猪胰腺提取液的高糖诱导液至完全覆盖培养皿底，在培养箱内诱导4天；5)吸除步骤4)的诱导液，再加入含10nmol/L Exendin-4和胰高血糖素样多肽-1，25μmol/L醋酸锌，质量百分数为2％胎牛血清和4％胎猪胰腺提取液的低糖诱导液至完全覆盖培养皿底，在培养箱内诱导2天，有50.3±9.4％的人骨髓间充质干细胞形成胰岛样细胞团；所述胰岛样细胞团直径为125.8±53.5μm，含有148.6±63.4个胰岛样细胞。