[发明专利]百喜草成熟种子离体培养植株再生方法

摘要

本发明涉及百喜草成熟种子离体培养植株再生方法，属于植物组织培养方法。以百喜草的成熟种子为外植体材料，在附加激素2，4－二氯苯氧乙酸2.0mg/L、6－苄基氨基嘌呤0.05mg/L的愈伤组织诱导培养基上，白色、湿润、颗粒状愈伤组织的诱导率达50％。在附加激素2，4－二氯苯氧乙酸2.0mg/L、6－苄基氨基嘌呤0.05mg/L的愈伤组织继代培养基上，白色或浅黄色、较干燥、颗粒状愈伤组织保持胚性状态。经过连续4代继代培养的颗粒状愈伤组织转到附加激素氯吡苯脲2.0mg/L和萘乙酸0.05mg/L的愈伤组织分化培养基上，绿苗分化率达30％以上。本项技术适用于百喜草的微繁殖、体细胞突变体筛选和基因转化。

主权项

1.百喜草成熟种子离体培养植株再生方法，其特征在于：1)材料选用百喜草的成熟种子为外植体材料；2)培养基基本培养基由MS大量元素、MS微量元素和B5维生素组成；愈伤组织诱导培养基和愈伤组织继代培养基：附加激素2，4-二氯苯氧乙酸2.0～4.0mg/L和6-苄基氨基嘌呤0.05mg/L；愈伤组织分化培养基：附加激素氯吡苯脲2.0mg/L和萘乙酸0.05mg/L；在愈伤组织诱导培养基、愈伤组织继代培养基和愈伤组织分化培养基中，添加蔗糖30g/L，并以8g/L的琼脂条作为固化剂；上述各种培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；3)培养方法百喜草的成熟种子先在300C水中浸泡48h，取出吸干种子表面水分，在超净工作台上用体积比70％的酒精浸泡30s，然后再用质量比0.1％的氯化汞处理20min，经过表面消毒的种子接种在愈伤组织诱导培养基上，在散射光下培养，15d从种子诱导产生出愈伤组织，选择白色、湿润、颗粒状的愈伤组织，在愈伤组织继代培养基上进行继代培养，经过连续4次继代培养后的颗粒状愈伤组织转移到愈伤组织分化培养基上，在光照条件下培养，15d分化出绿苗；培养室温度为25±20C，光照强度为15001x，光照时间为16h/d。