[发明专利]一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法

摘要

一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，属于微生物菌株筛选技术领域。其通过从初始还原糖浓度高达5％以上的除虫链霉菌100h-120h发酵液中分离出除虫链霉菌，并通过高还原糖浓度的平板，然后通过初筛、复筛，最后经过稳定性考察，筛选出耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株。此方法效率高、操作简单，筛选出来的菌株对高还原糖有强耐受性使得该菌不受还原糖浓度不稳定影响；且弥补了阿维菌素补糖工艺操作上的不便，使得其在补糖发酵中具有较大优势，从而在今后的阿维菌素发酵补糖工艺中大幅度提高阿维菌素的产量提供了科学依据。

主权项

1. 一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)发酵罐中装入发酵培养基，使其装液量达到65-75％，再加入淀粉酶，121℃灭菌后培养基中还原糖浓度达5.5-7％，然后按培养基体积3-7％的移种量，将除虫链霉菌种子液移种至该发酵罐中，在温度27-29℃，罐压0.04-0.06MPa，转速30-50rpm，通风量1100-1300L/h条件下发酵培养；(2)发酵100-120小时后，从上述发酵罐中无菌取发酵液，在无菌室中将取样液稀释成10-2、10-4、10-6梯度浓度，然后取不同稀释度的取样液0.1ml各涂布在葡萄糖梯度平板培养基上，取样液每个稀释度在每个葡萄糖梯度下平行涂3个平板，将上述涂布好的平板在温度27-29℃，湿度40-50％条件下倒置培养2-4天；(3)从上述的平板中挑取菌株生长良好、菌落多的平板，然后从挑选出来的平板中挑取单菌落划线接种至斜面培养基，在温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，再从斜面培养基上挖块接种至种子培养基，在温度27.5-28.5℃下，培养39-41小时后取培养液，按发酵培养基体积3-7％的接种量，接种至发酵培养基，在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下培养230-250小时，然后测定效价，挑选出效价较高的菌株；(4)将效价较高的菌株划线接种至斜面培养基，温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，再从斜面培养基上挖块接种至种子培养基，在温度27.5-28.5℃下，培养39-41小时后取培养液，按发酵培养基体积3-7％的接种量，接种至发酵培养基，在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下培养230-250小时，然后测定效价，挑选出效价较高的菌株；(5)将步骤(4)中挑选出的效价较高的菌株进行遗传稳定性考察，即通过斜面培养基传代培养，在温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，得到的各子斜面分别在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下发酵培养230-250小时，然后测定效价，挑选出具有较好遗传稳定性的菌株。