[发明专利]一种以大豆子叶节为受体不依赖组织培养的大豆遗传转化新方法

摘要

一种以大豆子叶节为受体不依赖组织培养的大豆遗传转化新方法，应用于生物技术和现代农业技术领域。本发明在传统的子叶节转化基础上，以不依赖组织培养的转化方法对大豆的遗传转化进行完善。在筛选有效的大豆子叶节再生系统的基础上，突出了不依赖组织培养的转化体系。通过常规大豆品种的转化验证，在田间栽培情况下进行直接转化，可促进转化部位丛生芽的萌发与生长。通过叶片喷施或涂抹，可有效对阳性枝进行筛选。阳性植株不需要经过生根过程，于转化后5个月可以直接获得转基因后代，很大程度上提高了大豆遗传转化效率，显著缩短了大豆遗传转化的周期。该转基因方法将改变大豆遗传转化难的现状，促进大豆遗传转化的研究和产业化发展。

主权项

一种以大豆子叶节为受体不依赖组织培养的大豆遗传转化新方法，其特征在于采用了以下步骤：a.不依赖组织培养的大豆转化系统：选取籽粒饱满的大豆种子，播种到培养钵或田间。5-7d后大豆出苗，小心用手术刀将大豆的顶芽和腋芽去除干净，造成锲形伤口，然后顺着脉络方向轻划5-6刀。用含有目的基因和选择标记基因的农杆菌或DNA的转化缓冲溶液对大豆子叶节部位进行侵染。b.建立共培养和芽诱导的适宜的条件：侵染后的子叶及子叶节部位用黑色袋罩好保湿，避光培养，培养温度为20-25℃，5-8天丛生芽生成，此时去掉黑色袋，置光下进行常规培养。c.经过10-15天培养后，芽体伸长长出1-3片叶片后，利用一定浓度的选择标记物质对叶片进行喷施或涂抹。2-3天后去除阴性的不定芽，选择标记物质筛选阳性的枝条进行常规培养。d.提取存留的大豆枝条嫩叶总DNA和种子总DNA，用PCR方法检测转基因大豆植株当代和T1代种子的转化特征。