[发明专利]一种频率可控的GC特异性DNA诱变方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域。具体涉及一种频率可控的GC特异性DNA诱变方法。先用氢氧化钠将待诱变基因变性为单链，再用对苯二酚和亚硫酸氢钠处理，使DNA链中的C脱氨基成为U；以修饰过的DNA为模板，PCR扩增使U跟A配对，后续扩增中，A继续与T配对，从而使原始DNA链中的GC向AT方向转换，获得突变DNA分子；将突变的DNA分子装载到表达载体，即可构建成DNA分子突变文库。随着亚硫酸氢钠处理时间的延长，DNA的最终突变频率也逐渐增大，最终可得突变频率达5％左右的DNA，从而克服一些常规随机诱变方法中诱变频率过低的问题。本发明是针对DNA分子中的GC碱基，GC突变占总突变率的90％以上，尤其适用于富含GC基因的诱变。本发明可用于DNA分子体外改良。

主权项

1、一种频率可控的GC特异性DNA诱变方法，其特征在于，包括以下步骤：用氢氧化钠使纯化的DNA变性，加入化学诱变剂对苯二酚和亚硫酸氢纳使其中的C脱氨基变成U，再通过PCR方法，使U与A配对，导致DNA中的GC向AT转换，从而达到诱变效果。