[发明专利]不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法

摘要

一种不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法，包括抗感芜菁花叶病毒的不结白菜亲本材料的筛选和栽培、亲本杂交和F1自交、芜菁花叶病毒的接种和检测、不结球白菜材料的DNA提取和抗感池建立、抗病基因的分子标记筛选、抗病基因连锁标记交换率和距离的计算以及抗病基因连锁标记图谱的建立等。其中：分子标记技术应用于对不结白菜抗感芜菁花叶病毒的亲本筛选和抗病基因连锁基因的标记，不同的分子标记有不同的反应体系和扩增程序。本发明构建了以不结球白菜为材料的抗芜菁花叶病毒基因的分子标记程序和体系，为不结球白菜抗病基因在染色体上的定位、抗病基因克隆和抗病分子辅助育种研究提供了依据。

主权项

1、一种不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法，其特征在于，包括步骤如下：①抗感芜菁花叶病毒的不结白菜亲本材料的筛选；②不结球白菜材料的栽培；③抗感亲本材料的杂交和子一代F1自交获得子二代F2群体，其中对抗性亲本为母本P1，感病亲本为父本P2；④芜菁花叶病毒在不结球白菜上的接种和检测；⑤不结球白菜材料的DNA提取；⑥不结球白菜抗芜菁花叶病毒的抗感池建立，即建立抗病DNA池RP和感病DNA池SP；⑦抗病基因的分子标记筛选；⑧抗病基因连锁标记交换率计算；⑨抗病基因连锁标记距离计算和图谱建立；其中：所述抗病基因的分子标记筛选，具体为：利用分子标记技术，对P1、P2、F1、RP和SP进行标记，针对抗病显性基因，筛选出P1、F1、RP有条带且P2、SP无条带的标记引物，再把这些引物用于标记P1、P2、F1、RP、SP和抗感病池中的F2个体，筛选出P1、F1、RP和抗病池F2个体有条带且P2、SP和感病池F2个体无条带的标记，即为抗病显性基因分子标记；针对抗病隐性基因，筛选出P2、SP有条带且P1、F1、RP无带的标记引物，再把这些引物用于标记P1、P2、F1、RP、SP和抗感病池中的F2个体，筛选出P2、SP和感病池F2个体有条带且P1、F1、RP和抗病池F2个体无条带的标记，即为抗病隐性基因分子标记；所述抗病基因连锁标记交换率计算，具体为：利用抗病基因分子标记的对P1、P2和F2群体进行标记，统计每个F2个体的抗病基因分子标记的情况，再与酶联免疫吸附测定法对F2群体的检测结果相比较，所有不一致的个体之和与F2个体数的百分比即为交换率；所述抗病基因连锁标记距离计算和图谱建立，具体为：把F2群体中抗病基因分子标记和酶联免疫吸附测定法对F2群体的检测结果进行处理，得出抗病基因与连锁标记间的距离，形成和输出图谱。