[发明专利]空肠弯曲杆菌的微需氧分离培养方法

摘要

本发明涉及一种空肠弯曲杆菌的微需氧分离培养方法，采用普通烛缸法与焦性没食子酸法相结合的方法来创造微需氧环境，对空肠弯曲杆菌分离培养采用直接划线培养法，用接菌环挑取少量动物组织检测样品直接接种在选择培养基上，用烛缸法配合焦性没食子酸和无水碳酸钠混合物来降低空气中氧气的浓度，利用无水碳酸钠形成碱性环境，促使焦性没食子酸与氧气反应吸收氧气，使培养环境达到空肠弯曲杆菌培养所需的微需氧条件。挑取分离培养获得的典型菌落，做PCR鉴定，进一步确定为空肠弯曲杆菌。本发明具有成本低廉、操作简单、检出率高、培养效果好等优点，提高了空肠弯曲杆菌的分离培养效率，解决了微需氧条件培养空肠弯曲杆菌的难点。

主权项

1、一种空肠弯曲杆菌的微需氧分离培养方法，其特征在于包括如下步骤：1)无菌取动物组织装入灭菌器皿中，作为待检样品；2)将采集的检测样品，直接划线接种在选择培养基平板上，置于加入焦性没食子酸和无水碳酸钠的磨口缸内，再放一支点燃蜡烛于缸中央，盖密缸盖；燃烛自行熄灭后，连同缸一并置于温箱中42℃培养观察；其中，焦性没食子酸和无水碳酸钠的用量各为2.0-3.0g/L，两者重量比为1：1；3)从样品培养所得的菌落中挑取可疑菌落，其中：第一型可疑菌落不溶血，灰白色、棕黄色、扁平、湿润、有光泽，半透明水滴状，凸起、光滑，边缘不整有从接种线向外扩散的倾向；第二型可疑菌落不溶血，圆形、有光泽、半透明，常呈分散凸起的单个菌落，边缘完整、发亮；4)将挑取的第一型可疑菌落或第二I型可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检，根据菌体染色特性取革兰氏阴性菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，将氧化酶和过氧化氢酶试验阳性者初步确定为可疑弯曲杆菌菌落；5)采用空肠弯曲杆菌特异性PCR检测方法，对初步确定的可疑弯曲杆菌菌落进行检测，对扩增出的358bpDNA片段进行测序，测序结果是空肠弯曲杆菌特异性片段的菌落即确定为空肠弯曲杆菌。