[发明专利]聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法

摘要

聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，它涉及一种猪胰岛移植复合物的制备方法。它解决了目前猪胰岛体外培养环境与体内环境存在差异，导致猪胰岛细胞在体外很难存活、不易在体外培养的问题。制备方法：一、处理聚羟基乙酸支架，二、三维微重力细胞培养。本发明制备的聚羟基乙酸-猪胰岛复合物提高了猪胰岛细胞体外培养的质量及体外存活的时间，并可改善猪胰岛细胞的活性和分泌胰岛素的功能，增加了具有活性和功能的猪胰岛细胞的数量，从而达到了提高胰岛移植成功率的目的，并为以后的糖尿病治疗奠定了物质基础。

主权项

1、聚羟基乙酸-猪胰岛复合物的制备方法，其特征在于聚羟基乙酸-猪胰岛复合物按以下步骤制备：一、处理聚羟基乙酸支架，将聚羟基乙酸支架用浓度为10mg/mL的多聚赖氨酸溶液包埋30min，然后放入超净台内吹干，再浸泡入体积浓度为75％的乙醇溶液中30min，之后用PBS缓冲液冲洗3～4次，再放入超净台内吹干，并用紫外灯照射1h；二、三维微重力细胞培养，将聚羟基乙酸支架放入三维微重力组织细胞培养系统的组织培养容器中，加入1mL培养基，然后将猪胰岛细胞均匀地放在聚羟基乙酸支架上，再加入RPMI-1640培养液，之后将组织培养容器中的气泡排空、盖紧组织培养容器盖，放入体积分数为95％空气、5％ CO2、37℃的恒温培养箱中进行微重力培养，即得到聚羟基乙酸-猪胰岛复合物；其中步骤二中三维微重力组织细胞培养系统的旋转速度在匀加速的情况下，在24小时中由15r/min增至45r/min，并保持45r/min的转速继续培养3～5天；步骤二中加入的培养基按以下步骤制备：先将10.4g的RPMI-1640培养基干粉溶于1L超纯水中，再加入浓度为10mmol/L的Hepes2～3g，并用NaHCO3溶液调pH值到7.4，滤过除菌后加入超纯水体积10％～20％胎牛血清，再加入青霉素和链霉素使培养基中青霉素终浓度为100U/mL、链霉素终浓度为100μg/mL。