[发明专利]结核分枝杆菌恒温基因扩增快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开一种结核分枝杆菌环介导恒温扩增基因试剂盒及检测方法，其中试剂盒采用生物信息平台进行大规模基因组分析，引入简并碱基和基因组分型处理，使引物设计更加完善。阳性率可大于99.9％假阳性率小于0.1％。并且本发明的样品前处理，根据检测试剂盒的需要进行的简易DNA提取方法缩短了检测时间，扩增在不到1小时即可完成，且产率高，提高了检测灵敏度，用于病原微生物的检测和传染病的诊断中，对结核分枝杆菌的最低检测极限达到10个细胞以内，标本的检出率达到97％，使得试剂盒的实际应用价值大大提高。另外，本发明在反应后加入染料，通过肉眼观察鉴定，无需电泳等其他任何分析步骤，结果鉴定更为直观清晰，避免了光线引起的误差。

主权项

一种结核分枝杆菌恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于，包括：引物混合液：四条引物浓度均为10pmol/μl，引物序列如下：外引物1：GCGATATCTGGTGGTCTGCA、外引物2：CCGTGGTTTCGAAAACAGCG、内引物1：AGACCACTCGTACCCGTCGCTTTTCGGTGGTTAACGCGCTATC、内引物2：ATGAGAAGTCGGAACCCCTGGGTTTTACCGTTGACCCCGTCTTCT；Bst DNA聚合酶；反应液：10mM脱氧核苷三磷酸dNTP，10×ThermoPol Buffer反映缓冲液，150mM硫酸镁MgSO4；样品预处理液：20mM Tris-HCl，pH 8.0；2mM乙二胺四乙酸，1.2％曲通Triton X-100；荧光染料SYBR Green I；阳性对照为人结核分枝杆菌基因组DNA。