[发明专利]60Coγ射线辐照微生物制备微生物油脂的方法

摘要

一种⁶⁰Coγ射线辐照微生物制备微生物油脂的方法，属于生物化工技术领域。采用⁶⁰Coγ射线辐照产油微生物菌体或其原生质体，获得油脂生产高产菌株，制备微生物油脂。优点在于，工艺操作简单，辐照菌体及原生质体正变率高，可显著提高产油微生物的油脂生产能力，从而降低微生物油脂生产成本。

主权项

1、一种60Coγ射线辐照微生物制备微生物油脂的方法，其特征在于，工艺步骤包括：(1)将产油微生物用无菌水洗下菌体，显微镜计数调节细胞浓度为5-7×106 个/mL，制备菌悬液；或将斜面培养的产油微生物接入液体培养基中，振荡培养14-16h，3000-5000r/min离心，弃去上清液，用高渗缓冲液洗涤，将离心后的菌体用0.1-0.3％β-巯基乙醇和0.1-0.5％的EDTA预处理菌体；然后再用1-2％蜗牛酶和0.1-0.5％溶菌酶及0.1-0.5％纤维素水解酶混合酶液处理菌悬液10-20h制备原生质体，原生质体形成率大于90％时，离心去酶液，用高渗缓冲液洗涤，悬浮原生质体；(2)将制备的细胞悬液或原生质体悬浮于高渗缓冲液中，用60Coγ射线辐照，辐照剂量100-1000Gy，剂量率3-5Gy/min，诱变后稀释10-3-10-6涂布于完全培养基上，于30-35℃黑暗条件下避光培养2-3d；(3)将培养好的菌落进行初筛，从致死率大于90％的照射剂量下再生的菌落里挑选大于3mm的突变株进行复筛。(4)将初筛得到的菌落接入种子培养基30-35℃，100-250r/min培养18-24h，以5％-10％体积接种量接入发酵培养基；在30-35℃、100-250rmp下振荡培养48-72h，发酵结束后，发酵液3000-5000r/min离心收集菌体，并提取微生物油脂，筛选高产菌株。