[发明专利]一种快速筛选炼油废水微生物絮凝剂产生菌的方法

摘要

一种快速筛选炼油废水微生物絮凝剂产生菌的方法，该方法能克服传统微生物絮凝剂产生菌筛选方法的不足，依据需要获得相应用途的絮凝剂，可定向筛选絮凝炼油废水的微生物絮凝剂的产生菌，实验表明传统筛选方法的平均筛出率为26.6％，本发明中的吡啶筛选方法的筛出率为44.3％。该方法工艺简单，工作量小，周期短，筛选效率高。

主权项

1. 一种快速筛选炼油废水微生物絮凝剂产生菌的方法，该方法是将样品接入吡啶培养基，以吡啶作为氮源，使可以耐受吡啶的微生物存活下来，然后将培养液稀释涂布，得到单菌，通过测其发酵液的絮凝活性，再筛选出絮凝剂产生菌，其特征在于絮凝剂产生菌的快速筛选过程如下：(一). 样品的采集实验样品主要来源于含油废水处理单元曝气池中的水样、活性污泥和钻井架旁被石油污染的土壤；(二). 培养基的制备①. 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白陈10g，NaCl 5g、琼脂15-20g，水1000mL，pH＝7.6；②. 富集培养基H1：葡萄糖20g，K2HPO4 12g，KH2PO4 11g，Na2SO4 2g，KCl 2g，MgSO4·7H2O4g，，NH4Cl 1g，酵母膏0.05g，吡啶50mg，水1000mL，自然pH；③. 富集培养基H2：葡萄糖20g，K2HPO4 12g，KH2PO4 11g，Na2SO4 2g，KCl 2g，MgSO4·7H2O4g，，NH4Cl 0.5g，吡啶100mg，水1000mL，自然pH；④. 富集培养基H3：葡萄糖20g，K2HPO4 12g，KH2PO4 11g，Na2SO4 2g，KCl 2g，MgSO4·7H2O4g，吡啶100mg，水1000mL，自然pH；⑤. 放线菌培养基：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4 0.01g，琼脂15-20g，水1000mL，pH7.2-7.4；⑥. 真菌培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂15-20g，水1000ml，自然pH；⑦. 查氏培养基：蔗糖30g，NaNO3 3g，K2HPO4 1g，FeSO4 0.01g，KCl 0.5g，琼脂15-20g，H2O 1000mL，自然pH；⑧. 通用发酵培养基：葡萄糖20g，(NH4)2SO4 0.2g，尿素0.5g，KH2PO4 2g，K2HPO45g，NaCl 0.1g，酵母膏0.5g，H2O 1000mL，pH7-8，自然状态即可；⑨. 种子培养基：葡萄糖20g，(NH4)2SO40.2g，尿素0.5g，KH2PO42g，K2HPO45g，NaCl0.1g，蛋白胨20g，酵母膏10g，牛肉膏10g，H2O1000mL，pH7.0；(三). 富集培养将样品稀释后加入富集培养基适当培养，筛选过程中共进行3次富集培养，这3次富集培养采用的富集培养基其氮源含量不同，具体如下：取一定量的样品直接加入富集培养基1中，30℃、140rpm摇床培养48小时后，以20％的接种量转接入富集培养基2，仍是30℃、140rpm摇床培养48小时，之后再以20％的接种量接入富集培养基3，30℃、140rpm摇床培养48小时；(四). 纯种的分离将富集培养液在①、⑤、⑥、⑦培养基平板上稀释涂布，获得纯菌株，并测定培养液的絮凝活性；(五). 菌种的筛选(1)初筛将纯化菌种接入装入通用发酵培养基，在一定条件下培养，通过絮凝实验，目测观察絮凝现象，选出絮体较大沉降速度较快的菌，进行下一步复筛；(2)复筛初筛得到的纯菌株在锥形瓶内进行发酵，得到的发酵液进行污水的絮凝试验，测絮凝前后废水COD、石油类和悬浮物的指标，挑选各指标去除率最大的菌株发酵液即为目标菌株。