[发明专利]一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法

摘要

本发明公开了一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法，其步骤是：A、样品的处理：经2％纤维素酶(0.65mol/LNaCl配制)和20mg/ml蛋白酶K处理后，于液氮、沸水浴中循环处理；B、PCR体系：将处理后的菌液加入PCR反应体系中进行PCR扩增；C、PCR产物的检测：对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳。本发明方法简便，操作方便，避免了传统曲霉菌DNA提取方法中繁琐的物理破除细胞壁的过程，并省去了DNA抽提步骤，克服了现有技术中因污染而影响检测结果的不足。

主权项

一种聚合酶链式反应检测曲霉菌的方法，包括以下步骤：A.将待检样品依次用纤维素酶和蛋白酶K处理，以破坏待检样品中所含曲霉菌的细胞壁；B.加入1％TritonX-100，置于液氮中冷冻，再置于沸水中加热，重复此冷冻和加热过程，使待检样品中所含曲霉菌之DNA得以释放；C.取经过步骤A和步骤B处理过的样品3μL～15μL模板，加入PCR反应体系中，用曲霉菌通用引物或曲霉菌特异性引物进行聚合酶链式反应扩增；D.对扩增后的DNA样品进行0.8％～1％琼脂糖凝胶电泳，在与所用引物相应的预期条带范围内检测到扩真增条带，即可确定样品中含有曲霉菌或确定菌种。