[发明专利]静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备方法，属于血液制品领域。本发明所解决的技术问题是提供了一种静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备方法。该方法包括融化血浆、组分分离、过滤、沉淀溶解、滤液沉淀、层析、超滤、病毒灭活、成品配制及分装等步骤。本发明方法制备的注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的质量好、收率与纯度高(对生产的10批产品进行检测，IgG的纯度均≥99％，IgG单体与二聚体的含量≥97％)、病毒安全性高，具有广阔的应用前景。

主权项

1.静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备方法，包括如下步骤：a、融化血浆：将乙型肝炎表面抗体效价≥8IU/ml的原料血浆于0～4℃融化；b、组分分离：用质量百分含量为0.9％的氯化钠溶液稀释血浆至蛋白质含量为45～55g/L，调节pH值至7.0±0.4，加入95％乙醇至反应液乙醇浓度为8％，反应过程温度控制在-2.5±0.5℃，离心分离上清液，即得FI反应液；c、过滤：将FI反应液调节pH值至6.80±0.10，加入95％乙醇至乙醇终浓度为20％，将反应液温度控制在5.0±0.5℃，加入硅藻土吸附杂质，搅拌、静置、过滤，所得沉淀即为FII+III沉淀；d、沉淀溶解：将FII+III沉淀用0.01mol/L的氯化钠溶液溶解，调节溶液pH值至5.10±0.05，调节溶液离子强度为0.01，加入95％乙醇至溶液中乙醇浓度为17％，控制溶液温度为-4.5±0.5℃，搅拌、静置、过滤，所得滤液即为FII滤液；e、滤液沉淀：FII滤液中加入氯化钠溶液，调节溶液离子强度为0.05，调节溶液pH值至6.90±0.05，加入95％乙醇至溶液中乙醇浓度为25％，每升乙醇补加1mol/L氯化钠溶液0.05L，控制最终反应液温度为-7.5±0.5℃，搅拌、静置、过滤，即得FII沉淀；f、层析：FII沉淀用注射用水溶解后过滤，滤液用注射用水透析脱醇，然后用阴离子交换凝胶层析纯化，得到IgG溶液；g、超滤：将IgG溶液超滤，所得超滤液4倍浓缩，然后用注射用水调节超滤液中蛋白浓度为15±5g/L，用0.5mol/L的盐酸调节超滤液pH值至4.8±0.1、电导率不超过350uS/cm；h、巴氏灭活病毒：将g步骤所得溶液于60±0.5℃水浴中连续加温10小时；i：低pH孵放灭活病毒：将h步骤灭活病毒后的蛋白溶液过滤、澄清、再次超滤，然后用0.5mol/L的盐酸调整蛋白溶液pH值为3.8～4.4、乙型肝炎表面抗体效价≥50IU/ml，补加麦芽糖至麦芽糖质量浓度为10％，过滤除菌，然后于23～25℃放置21天；j：成品分装：按所需规格分装、即得。