[发明专利]TRPML3(MCOLN3)作为咸味受体的鉴定及在用于鉴定调控钠转运、吸收或排泄和/或醛固酮和/或血管加压素的产生或释放的味觉(咸味)调节剂和/或治疗剂的测定中的用途

摘要

本发明涉及用于鉴定人TRPML3调节剂(优选地TRPML3增强剂)的基于高通量哺乳动物细胞和中等通量卵母细胞的电生理测定。测定中调控TRPML3功能的化合物预期影响人的咸味味觉。本发明的电生理测定(诸如二电极电压钳技术)有助于鉴定特异调控人TRPML3的化合物。本发明的测定提供了用来检测促进(增强)或抑制TRPML3功能的化合物的强有力的筛选。因此增强或阻抑TRPML 3通道活性的化合物应调控咸味味觉。另外，这些化合物可用来调节钠排泄、尿输出和与钠水平相关的其他生物功能。本发明涉及阐明TRPML3参与灵长类动物(包括人和可能其他哺乳动物)的咸味感受(考虑到钠和其他离子对生理功能和条件的重要性，这一表型在不同动物中可能是非常保守的)。TRPML3基因还调控钠代谢、钠排泄、血压、液体潴留、心脏功能和诸如尿液产生和排泄的泌尿功能的一种或多种。本发明人基于基因表达测定、相似测定、已有报道和功能(电生理)研究鉴定TRPML3编码灵长类动物和人(以及可能其他哺乳动物)的咸味受体，所述基因表达测定确定了TRPML3特异地在味蕾细胞中表达，而不在舌上皮细胞中表达，所述相似测定确定了TRPML3特异表达或富集于不表达TRPM5或PKD2L1的味觉细胞亚群的味蕾细胞的上半部分，所述已有报道证明TRPML3在诸如耳的其他感觉器官中表达(因此进一步证实了TRPML3作为“专业”感觉基因的作用)、TRPML3在调节钠代谢中发挥重要作用的肾上腺(因为其调节钠代谢的关键分子醛固酮)中强表达及与其相关的事实(即，引发强烈盐渴求的自身免疫病，爱迪生氏病，涉及肾上腺的破坏)，所述功能(电生理)研究表明TRPML3传导钠并且显示与人咸味受体一致的生化特性(通过K+、Li+，并且对阿米洛利不敏感)。本申请还公开了用于鉴定灵长类动物味觉特异基因的新原理和方法，所述基因包括参与咸味感受(特别是人咸味感受)的基因，以及参与甜味、苦味、鲜味和酸味味觉和包括脂肪味觉(fat taste)的其他味觉感受的基因，和参与其他味觉细胞或味觉受体相关活性的基因，所述相关活性诸如消化功能和消化相关疾病、味觉细胞周转、口腔和消化道的免疫调节和诸如在糖尿病和肥胖中的代谢调节。使用这些方法鉴定的基因可用在用于鉴定味觉调节剂(增强剂或阻抑剂)和调控这些基因活性的潜在治疗剂的测定中。

主权项

分离的味觉细胞、肾上腺细胞、垂体细胞、甲状旁腺细胞、黑色素细胞或泌尿器细胞，或富集的味觉细胞样品，其中所述分离或富集的细胞样品包含表达TRPML3离子通道多肽的细胞。