[发明专利]来自多个核酸的蛋白质表达

摘要

本发明报道了用于在CHO细胞中重组产生分泌异源免疫球蛋白的方法，其包括以下步骤：i)提供CHO细胞，其适合在悬浮培养中生长，适合在无血清培养基中生长，无支原体，并且无病毒，ii)提供载体，其包含原核复制起点，赋予针对原核选择剂抗性的第一个核酸序列，编码所述异源免疫球蛋白重链的第二个核酸，和编码所述异源免疫球蛋白轻链的第三个核酸序列，赋予对真核选择剂抗性的第四个核酸，iii)转染所述CHO细胞，其中所述转染包括a)用包含赋予对第一种真核选择剂抗性的第四个核酸的所述载体转染所述CHO细胞，b)通过在含有所述第一种真核选择剂的培养基中的生长来选择CHO细胞，c)用包含赋予对不同于所述第一种真核选择剂的第二种真核选择剂抗性的第四个核酸的所述载体转染所述选择的CHO细胞，d)在含有所述第一种和所述第二种真核选择剂的培养基中选择生长来选择CHO细胞，iv)在适合于表达所述第二个和第三个核酸的条件下，在存在所述第一种和所述第二种真核选择剂的培养基中培养所述转染的CHO细胞，和v)从所述培养基中回收所述分泌的异源免疫球蛋白。

主权项

用于在CHO细胞中重组产生分泌到培养基中的异源免疫球蛋白的方法，其包括：a)提供CHO细胞，其-适合在悬浮培养中生长，-适合在无血清培养基中生长，-无支原体，b)提供核酸，其包含-原核复制起点，-赋予对原核选择剂抗性的第一个核酸序列，-编码所述异源免疫球蛋白重链的第二个核酸序列，和编码所述异源免疫球蛋白轻链的第三个核酸序列，由此，提供第一个转染载体，其包含所述提供的核酸，和赋予对第一种真核选择剂抗性的额外的第四个核酸序列，由此，提供第二个转染载体，其包含所述提供的核酸，和赋予对第二种真核选择剂抗性的额外的第四个核酸序列，其中所述第二种真核选择剂不同于所述第一种真核选择剂，c)转染所述CHO细胞，其中所述转染包括以下顺序的以下步骤：(i)用所述第一个转染载体转染所述CHO细胞，(ii)通过在培养基中选择生长来选择在(i)中转染的CHO细胞，所述培养基含有第一个转染载体赋予对其抗性的第一种真核选择剂，(iii)用所述第二个转染载体转染(ii)中所述选择的CHO细胞，(iv)通过在培养基中选择生长来选择在(iii)中转染的CHO细胞，所述培养基含有所述第一个转染载体赋予对其抗性的所述第一种真核选择剂，并且含有所述第二个转染载体赋予对其抗性的所述第二种真核选择剂，d)在所述第一种和所述第二种真核选择剂存在下，在适合于表达所述第二个和/或第三个核酸的条件下，在培养基中培养所述转染的CHO细胞，e)从所述培养基中回收所述分泌的异源免疫球蛋白，并由此在CHO细胞中产生异源免疫球蛋白，其被分泌到所述培养基中。