[发明专利]一种用于研究胚胎干细胞发育分化的细胞外基质凝胶模型

摘要

本发明涉及一种用于研究胚胎干细胞发育分化的细胞外基质凝胶模型。本发明属组织工程与再生医学研究领域，主要用来解决体外进行胚胎干细胞分化发育研究没有理想模型这一问题。我们采用细胞外基质凝胶作为胚胎干细胞分化发育的体外三维模型，将胚胎干细胞以不同细胞密度接种到三维模型中，观察胚胎干细胞自发分化形成拟胚体的现象，以及拟胚体分化为不同谱系细胞的规律。并通过调控胚胎干细胞生长的微环境，以细胞外基质凝胶为主体进行胚胎干细胞的定向分化与发育研究，进而揭示胚胎干细胞体外分化发育的内在规律与机制，并寻求胚胎干细胞向重要生命器官处于终末分化阶段的功能细胞定向分化新方法。这一发明将为探索胚胎干细胞发育机制提供了新的技术方法。

主权项

一种用于研究胚胎干细胞发育分化的细胞外基质凝胶模型的制备方法，步骤包括：(1)将I型液态胶原与Matrigel胶按4∶1混合均匀，然后将其与H-DMEM浓缩培养液等体积混合，用0.1M的NaOH适量，将混合物pH值调为7.2～7.4，加入至已制备好的12孔板模具中，每孔各注入1ml；将其置于37℃、5％CO2培养箱中孵育5mim至30mim，待液态复合物凝固制成无ESC的三维立体细胞外基质凝胶模型；(2)将ESC直接加在已制备好的固态三维立体细胞外基质凝胶模型表面，添加1ml不含LIF的ESC全培养液，从而得到含有胚胎肝细胞的细胞外基质凝胶模型。