[发明专利]一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法无效
| 申请号： | 200910000836.0 | 申请日： | 2009-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN101781649A | 公开（公告）日： | 2010-07-21 |
| 发明（设计）人： | 邱德有;刘敏;李凤岚 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院林业研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/82;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N30/02 |
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| 地址： | 100091*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA415基因前体(precusor)表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞中，转化获得转基因细胞。HPLC检测结果显示：曼地亚红豆杉转基因细胞系中C-14位氧化紫杉烷的含量发生显著地降低。本方法的优点：高效地降低了曼地亚红豆杉细胞曼地亚红豆杉细胞上述三种C-14位氧化紫杉烷的总含量。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞C-14位氧化紫杉烷的生物合成，可以使代谢流转向紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatinIII)等C-13位氧化紫杉烷(C-13 oxygenated taxoids)，为全面提高红豆杉细胞紫杉醇的生物合成产量提供一种新方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 微小 rna 高效 抑制 红豆杉 细胞 合成 14 氧化 紫杉 方法 | ||
【主权项】：
一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)从水稻基因组DNA中克隆得到微小RAN基因前体；(2)构建载体，载体宿主菌为根癌农杆菌；(3)农杆菌浸泡法转化红豆杉细胞；(4)筛选转基因细胞；(5)C-14氧取代的紫杉烷含量分析。
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