[发明专利]高纯度马抗狂犬病毒抗体F(ab')2片段

摘要

本发明涉及一种用于治疗、预防狂犬病的高纯度马抗狂犬病抗体F(ab’)2片段的制备和纯化的方法，通过该方法得到的抗狂犬病毒抗体F(ab’)2片段纯品中F(ab’)2的纯度大于99％，白蛋白的残留检测不出，抗体效价大于500IU/mL。

主权项

一种制备用于治疗和预防狂犬病毒的抗狂犬病毒抗体F(ab’)2片段纯品的方法，其特征在于该抗体F(ab’)2片段纯品是由如下制备方法制成的：1)使用狂犬病毒疫苗加入不完全福氏佐剂乳化制备免疫原，并配合干扰素α-2a和白细胞介素2，采用多点免疫马匹，共免疫三次、间隔10天免疫一次。2)采集马抗狂犬病毒血浆，用生理盐水稀释1倍并加入20％饱和度硫酸铵混匀、离心弃沉淀，上清再加入10％饱和度硫酸铵混匀离心，收集沉淀。沉淀用20mM PB，pH7.4溶解。使用中空纤维超滤柱，截留分子量为50kD，进行浓缩，采用20mMPB，pH7.4，0.15M NaCl对浓缩后的蛋白溶液进行换液，得到马抗狂犬病毒IgG；3)马抗狂犬病毒IgG用稀盐酸调PH值至4.5后使用胃蛋白酶进行酶切，然后用2mol/L Tris-HCl，pH8.0调PH值至pH7.4，加热58℃、30min，离心10000rpm，20min去除沉淀的Fc段，上清为初步纯化的马抗狂犬病毒抗体F(ab’)2片段。4)初步纯化的马抗狂犬病毒抗体F(ab’)2使用Q Sepharose FastFlow层析介质，用20mM PB，pH7.4平衡，上一步得到的样品稀释上样，再次平衡后用20mM PB，pH7.4，0～0.5M NaCl梯度洗脱，得到进一步纯化的抗狂犬病毒抗体F(ab’)2片段。5)使用Sephacryl S-100High Resolution层析介质，使用20mMPB，pH7.4，0.15M NaCl平衡，上一步得到的样品上样，平衡，收集目的蛋白峰，即得到纯品的抗狂犬病毒抗体F(ab’)2片段。