[发明专利]一种快速测定硒多糖中硒含量的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定硒多糖中硒含量的方法。本发明通过分别取相同体积配制好的梯度硒标准溶液处理后做高效液相色谱检测，绘制标准曲线并建立回归方程；然后，将待测干物质硒多糖用混酸消解后稀释定容，配制待测样品溶液，取与被处理的梯度硒标准溶液相同体积的该样品溶液，以同样的条件处理后做高效液相色谱检测，根据所建立的回归方程算出待测样品溶液的硒浓度并进一步确定干物质硒多糖的含硒量。本发明克服了以往高效液相色谱法测定硒含量过程中样品与流动相不溶、线性范围较窄等缺点；本发明方法检测结果准确可靠，重复性好，简化了检测步骤，节省了测定时间，测定费用低。

主权项

1.一种快速测定硒多糖中硒含量的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)绘制标准曲线并建立回归方程：取相应体积的硒标准溶液母液分别定容于同一容量的容量瓶中，所述硒标准溶液母液的浓度为50～500ug/ml，所述同一容量的容量瓶为容量10ml或以上的容量瓶，依次稀释制成浓度范围为0.005～1ug/ml的梯度硒标准溶液，分别取10ml各梯度硒标准溶液加入0.2mol/L的EDTA-2Na溶液和0.5mol/L的盐酸羟胺各2～4ml，振荡均匀后静置5～10min，暗处分别加入0.1％的2，3-二氨基萘溶液2～4ml，沸水浴4～6min，取出冷却至室温后，加入环己烷5ml，充分振荡萃取，取环己烷层注入高效液相色谱检测，以峰面积平均值对梯度硒标准溶液浓度绘制标准曲线并建立回归方程；(2)待测样品的消解：称取待测干物质硒多糖，加入混酸，所述干物质硒多糖和所述混酸的比例为重量∶体积＝0.01～0.03g∶2ml，所述混酸中各成分的体积比为HNO3∶H2SO4∶HClO4＝1∶1∶4，静止过夜后在135℃中消解1～2小时，得消解液A；(3)消解液的处理和高效液相色谱检测：将消解液A用蒸馏水稀释定容于容量10ml或以上的容量瓶中，所定容的样品溶液的硒浓度在步骤(1)中所制备的梯度硒标准溶液的浓度范围0.005～1ug/ml以内，取10ml该样品溶液按照与步骤(1)中处理10ml梯度硒标准溶液完全相同的实验条件处理，即加入0.2mol/L的EDTA-2Na溶液和0.5mol/L的盐酸羟胺各2～4ml，振荡均匀后静置5～10min，暗处加入0.1％的2，3-二氨基萘溶液2～4ml，沸水浴4～6min，取出冷却至室温后，加入环己烷5ml，充分振荡萃取，取环己烷层注入高效液相色谱检测，将峰面积平均值代入步骤(1)中所建立的回归方程算出定容后样品溶液的硒浓度，再根据所定容的样品溶液含硒的总量和所用待测干物质硒多糖的重量算出所测干物质硒多糖的硒含量。