[发明专利]一种绿麦芽抗菌蛋白分离纯化方法

摘要

本发明属于蛋白质分离纯化技术领域，具体涉及一种采用缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析、凝胶过滤层析、阳离子交换层析分离纯化从绿麦芽中制备抗酵母蛋白的方法。其是将绿麦芽粉粹后加入0.05M硫酸浸提，后硫酸铵分级沉淀，透析后经多种层析柱纯化后得到一种抗酵母蛋白，经SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条带，说明已达到电泳纯。本发明具有纯化效果好，提取率高等特点。

主权项

1、一种绿麦芽抗菌蛋白的分离纯化方法，其特征在于包括如下步骤：第一步、绿麦芽抗菌蛋白粗提液的制备，将绿麦芽粉碎后，与0.05M硫酸以1∶3～7混合，冰浴或4～6℃提取2～4小时，每隔10～15min搅拌一下，用离心机离心取上清，采用碱中和调PH为6.5～7.0，加硫酸铵分级沉淀，离心弃上清，用水复溶抗菌蛋白，将复溶的抗菌蛋白加到排阻1000Da的透析袋中，pH7～8、0.02～0.05mol/L Tis-HCl缓冲液透析至无硫酸根离子，浓缩样品，得到绿麦芽抗菌蛋白粗提液；第二步、阴离子交换柱层析：填料：DEAE纤维素52；柱体积：1.6×20cm；平衡液：50mmol Tis-HCl，pH7～8；平衡体积：200ml；流速：1ml/Tub/1min；洗脱液：50mmol Tis-HCl，pH7～8和含0.5mol/l的50mmol Tis-HCl，pH7-8；上样：绿麦芽抗菌蛋白粗提液；UV280nm检测，收集未吸附的蛋白，并冷冻干燥成干粉；第三步、分子筛柱层析：填料：葡聚糖凝胶G-50；柱体积：1.6×40cm；平衡液：50mmol Tis-HCl，pH7～8；流速：3ml/Tub/7min；洗脱液：50mmol Tis-HCl，pH7～8；上样：经阴离子交换柱层析分离的未吸附并冻成干粉的蛋白经洗脱液溶解后上样；检测波长：280nm；收集有抗菌活性峰，并冷冻干燥冻成干粉；第四步、阳离子交换柱层析：填料：羧甲基葡聚糖C-50；柱体积：1.6×20cm；平衡液：50mmol柠檬酸-磷酸盐，pH5～6；洗脱液：50mmol柠檬酸-磷酸盐，pH5～6；洗脱体积：200ml；流速：3ml/Tub/6min；检测波长：280nm；上样：经分子筛柱层析分离的有抗菌活性的蛋白干粉，经加洗脱液溶解后上样；无需梯度洗脱，收集有抗菌活性峰，并冷冻干燥。