[发明专利]一种发酵制备除臭酶制剂的方法

摘要

本发明公开了一种发酵制备除臭酶制剂的方法，属于生物技术与生物工程领域。本发明选用链霉菌(Streptomyces sp.)DS-021为除臭酶制剂的生产菌种，采用发酵方法生产用于去除环境恶臭物质的酶制剂。制备过程包括液体种子制备、发酵液制备、发酵液预处理、产物提取与精制、成品加工，制备的高效除臭酶制剂可广泛地应用于安全去除环境中的恶臭物质。本发明发酵制备除臭酶制剂的方法，工艺简单，且具有能大量生产，收率高(收率≥96％)和纯度高(纯度≥90％)的优点。

主权项

1、一种发酵制备除臭酶制剂的方法，包括以下步骤：1)液体种子制备种子培养基的水溶液组成为：淀粉10-30g/L；(NH4)2HPO4 3-10g/L；K2HPO4 0.4-1.5g/L；MgSO4 0.3-1.2g/L；CaCl2 0.2-1.2g/L；玉米浆0.2-2.0g/L；制备方法：将水和按上述浓度称取的以上各种原料加入配料容器中，搅拌加热至各成分溶解，用NaOH溶液调pH值至7.0-7.4，装入种子罐，在蒸汽压力1Kg/cm2条件下灭菌30min，降温使培养基冷却至25-33℃，得灭菌种子培养基备用；液体种子制备：每100L灭菌种子培养基接种50ml种龄5天的茄子瓶链霉菌DS-021孢子悬液进行搅拌培养，培养温度为25-35℃，无菌空气通风体积比1∶0.15-1∶0.55，搅拌转速为150-350r/min，培养28-42h，得液体种子备用，所述的孢子悬液浓度为0.8×108-1.2×108个孢子/ml，所使用的茄子瓶规格为250ml；2)发酵液制备发酵培养基的水溶液组成：玉米粉15-40g/L；(NH4)2HPO4 5-15g/L；K2HPO4 0.3-1.2g/L；MgSO4 0.2-1.0g/L；CaCl2 0.1-1.0g/L；玉米浆0.5-1.5g/L；发酵培养基的制备：方法与种子培养基的制备步骤相同，将配制的发酵培养基装入发酵罐；发酵液制备：将重量比为5-15％的液体种子接入发酵罐进行搅拌培养，培养温度为25-35℃，无菌空气通风体积比1∶0.25-1∶0.85，搅拌转速为120-250r/min，培养32-45h，得发酵液备用；3)发酵液预处理将发酵液升温至65-85℃，保持10-25min后将温度降至20-45℃，加入5-15ppm的聚氨基葡萄糖进行生物絮凝，去除菌体及其它杂质，得发酵清液备用；4)产物提取与精制(1)产物沉淀往发酵清液中先加入重量体积比为0.05％-0.35％的硅藻土搅拌5-15min，再加入重量体积比为0.05％-0.35％的丹宁搅拌5-15min，静止20-60min后离心分离，得沉淀复合物；(2)产物分离将沉淀复合物分散于5-8倍重量的水中，加入产物液量重量体积比为0.05％-0.35％的PVP，搅拌0.5-3h后离心分离，得酶清液备用；5)成品制备将酶清液用截留分子量为5000-50000的有机超滤膜进行浓缩，在浓缩液中加入稳定剂明胶，获得液态酶制剂；把酶清液用喷雾干燥器干燥获得粉末，在粉末中加入保护剂糊精，获得固态酶制剂。