[发明专利]一种同时检测五种肠道病毒的寡核苷酸芯片及其应用

摘要

本发明公开了一种同时检测五种肠道病毒的寡核苷酸芯片及其应用，所述芯片由基片和涂布于其上的五种肠道病毒病原体探针以及阴性对照、阳性对照、空白对照制成，其中所述病原体探针是5条54-70mer的HAV-P、ROV-P、NOV-P、ASV-P、ADV-PV1探针；本发明采用多重PCR对多种病原体靶序列进行同时扩增，采用下游引物Tamara标记的方法对PCR产物进行荧光标记，标记的PCR产物与芯片进行杂交实现对病原体准确检测，检测灵敏度与PCR相当，特异度高。检测效率和准确性明显缩短。本发明的技术体系适用于海水及海洋生物标本监测，食品卫生监督，海关检疫及相关的临床检测等领域。

主权项

1.一种同时检测五种肠道病毒的寡核苷酸芯片，由表面醛基化修饰的载玻片基片和阵列涂布于其上的五种肠道病毒病原体探针以及阴性对照、阳性对照、空白对照制成，其中所述阴性对照为点样浓度为10μM的JEV探针，其序列为：NH2-(CH2)6-Poly(dT)15-GTGCAAACAAGGTTTCACTGATCGTGGGTGGGGCAACGGATGTGGACTTTTCGGGAAGGGAAGCATTGAC；所述阳性对照为点样浓度为10μM的合成标记探针，探针的序列为NH2-(CH2)6-Poly(dT)15-Tamara；所述空白对照为双蒸水；其特征在于：所述五种肠道病毒病原体探针是5条54～70mer的、点样浓度均为10μM的HAV、ROV、NOV、ASV和ADV病原体探针；其中：所述HAV病原体探针序列为：HAV-P：NH2-(CH2)6-Pol(dT)15-TTAAAGATCCACAGTATCCAGTTTGGGAATTAACAATCAGAGTTTGGTCAGAGCTGAACTTTGGAACAG；所述ROV病原体探针序列为：ROV-P：NH2-(CH2)6-Pol(dT)15-TTATGTCTGTATTATOCAACTGAAGCAAGTACTCAAATCAATGATGGTGACTGG；所述NOV病原体探针序列为：NOV-P：NH2-(CH2)6-Pol(dT)15-GGTAGCAGAAGACCTTCTTTCTCCTAGCGTGGTGGATGTGGGTGACTTCACAATATCAATCAACGAG；所述ASV病原体探针序列为：ASV-P：NH2-(CH2)6-Pol(dT)15-GAATTCGTTGTCATAAAACCAGGTGCATTATGTGTTATAGTCACCCCTGAAGGAAAAGGGACAGGTT；所述ADV病原体探针序列为：ADV-P：NH2-(CH2)6-Pol(dT)15-CTACTTCGTATATTCTGGATCTATTCCCTACCTGGATGGCACCTTCTACCTTAACCACACTTTCAAG；所述芯片的阵列布局如图1所示。