[发明专利]红曲米固态发酵生产凝乳酶的方法

摘要

本发明涉及一种红曲米固态发酵生产凝乳酶的方法。将红曲米粉接种到固态发酵培养基上，28-30℃恒温培养90-96h；培养水提、浓缩得凝乳酶溶液；加入乙醇进行醇沉两次，冷冻升华干燥得凝乳酶粗酶，然后纯化得凝乳酶。本发明利用传统发酵工艺与现代生物制剂技术相结合生产凝乳酶，本发明原料来源广泛、价格低廉、产率高，所产凝乳酶活力高。

主权项

1.一种红曲米固态发酵制备凝乳酶的方法，步骤如下：1)红曲米粉碎成粉状，细度200-400目，将红曲米粉接种到固态发酵培养基上，28-30℃恒温培养90-96h；2)向上述培养物中加入蒸馏水，蒸馏水体积是培养物体积的2-2.5倍，抽滤，取滤液，旋转蒸发仪浓缩至原体积1/3-1/4，得凝乳酶溶液；3)向上述凝乳酶溶液加入乙醇进行醇沉两次，两次醇沉中使用的乙醇体积均是凝乳酶溶液体积的2-3倍，4-6℃低温离心，冷冻升华干燥，即为凝乳酶粗酶；4)将上述步骤3)得到的凝乳酶粗酶溶于pH为6.2的磷酸缓冲液中，即为凝乳酶粗液；5)使用Sephadex G-75凝胶柱层析纯化凝乳酶粗液，以pH6.2的磷酸缓冲液作为洗脱液，分步收集，检验收集液的活性，合并有活性的洗脱液；6)利用DEAE-纤维素52对上述洗脱液进一步纯化，以pH7.2的磷酸盐缓冲液为起始缓冲液，采用NaCl梯度洗脱，分步收集，检测活性，合并有活性洗脱液，浓缩冻干得凝乳酶。