[发明专利]一种双色竞争性荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种双色竞争性荧光定量共扩增聚合酶链反应试剂盒，首先根据21号染色体特异序列DSCR区段序列和2号染色体上的USC2序列分别合成其特异共用引物和特异性双色Taqman探针，然后在PCR扩增缓冲反应体系中在多色荧光定量热循环仪上进行高温、低温、中温的反复热循环，实现两个DNA片段的竞争性扩增。在PCR扩增的同时检测扩增过程中由于降解Taqman探针获得的两个DNA片段扩增的荧光信号的强弱变化情况，获得扩增动力学曲线图，进而得出各个标本的上述两个DNA片段扩增的Ct值，从而计算它们的拷贝数比值，再根据两个基因拷贝数的比值进一步判断21号染色体的倍性。

主权项

1、一种双色竞争性荧光定量PCR试剂盒，含有扩增21号染色体特异单拷贝区段DSCR和2号染色体特异单拷贝区段USC2的竞争性荧光定量PCR试剂，其特征在于：首先根据21号染色体特异序列DSCR区段序列和2号染色体上的与之有一定的同源性的特异单拷贝USC2序列分别合成其共用PCR引物和特异性双色Taqman荧光探针，然后将0.2-0.4umol/LDSCR和USC2特异的共用引物、DSCR特异的和USC2特异的双色荧光Taqman探针加入同一个PCR扩增缓冲反应体系，在多色实时荧光定量PCR仪上进行96℃预变性2min，然后94℃变性10sec，50-55℃复性30sec，60℃延伸40sec，共45个循环，并在延伸时检测荧光强度，使引物分别同时竞争性地引导DSCR和USC2两种特异单拷贝DNA区段的新链合成，实现两个基因片段的竞争性扩增和其拷贝数的定量检测，所述的DSCR和USC2特异的共用引物为：上游引物5’-AAA GTT TCT TCT GGA TCT ACA G-3’；下游引物：5’-TCC TCT GTGCTC TGA GCT AAG-3’；探针的序列和荧光标记：DSCR TaqMan探针：5’-[FAM]ACA TTTTGG ATG CAC TGG GA[TAMRA]-3’；USC2特异TaqMan探针：5’-[HEX]CAA AAC TCACAG AGG GAC TC[TAMRA]-3’。