[发明专利]一种人羊水干细胞系的建立方法

摘要

本发明涉及一种人羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行分离纯化；3)将分离得到的羊水干细胞经过单克隆筛选和扩增培养，建立羊水干细胞系。本发明提供了一种快速、有效、安全、可实现人羊水干细胞体外长期扩增、可为组织工程研究提供新的种子细胞来源以及有望作为种子细胞进行临床应用的人羊水干细胞系的建立方法。

主权项

一种人羊水干细胞系的建立方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；3)将分离纯化后的羊水干细胞建立羊水干细胞单克隆，后进行扩大培养，建立羊水干细胞系，其具体实现方式是：3.1)取初步纯化的细胞制成悬液，台盼蓝染色后计数测定活细胞浓度；3.2)用培养液将细胞悬液稀释成不同浓度，并于37℃、5％CO2培养箱中培养；培养基成份为α MEM+15％FBS+2％谷胺酰胺+1％青链霉素；3.3)待细胞贴壁后，显微镜下观察挑选并标记只含一个细胞的孔，继续培养；3.4)培养期间，根据培养液中pH值的变化情况判断是否有明显单克隆出现。若有，则用0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化单克隆细胞，分别进行扩大培养；若否，则放弃培养，不再继续换液；3.5)待细胞达到70％ 90％融合时，传至培养皿中继续扩增培养，此时得到的细胞经连续传代40代以上，即建成羊水干细胞系。